Page 32 - 《中国药房》2022年24期

2.4 肝组织中Akt、p-Akt、E-cadherin、vimentin蛋白表 含量均显著降低（P＜0.05或P＜0.01），柠檬苦素低剂量
达的检测 组大鼠血清中 LN 含量差异无统计学意义（P＞0.05）。
取“2.1”项下各组 3 只大鼠冻存在－80 ℃冰箱中的 结果见表2。
肝组织，称定质量后尽可能剪碎，加入组织蛋白抽提试 表2 柠檬苦素对肝纤维化模型大鼠血清纤维化指标的
剂，冰浴匀浆、超声破碎及离心后收集上清液，测定各样 影响（x±s，ng/mL）
本蛋白含量。对蛋白进行加热变性处理后，电泳分离蛋 组别 n HA LN
正常组 8 19.28±5.30 119.07±16.13
白，转膜，封闭，洗膜后，分别加入 E-cadherin、p-Akt、 模型组 8 69.43±12.64 a 187.63±40.22 a
Akt、vimentin、GAPDH 一抗（稀释度分别为 1∶1 000、 阳性对照组 7 27.46±1.80 b 140.37±26.30 b
柠檬苦素高剂量组 7 21.17±4.20 b 149.14±12.44 c
1∶3 000、1∶3 000、1∶10 000、1∶10 000），4 ℃孵育过夜；
柠檬苦素低剂量组 7 27.06±5.45 b 181.43±21.45
膜洗涤后加入相应的二抗（稀释度为 1∶200），室温孵育 a：与正常组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.01；c：与模型组
后，漂洗，ECL 化学发光和曝光显影及定影。使用 Gel- 比较，P＜0.05
Pro Analyzer 4软件分析目标蛋白的灰度值，以目标蛋白 3.3 柠檬苦素对肝纤维化模型大鼠肝组织病理学变化
与内参蛋白（GAPDH）的灰度值比值表示目标蛋白的表 的影响
达水平，并计算p-Akt/Akt比值。 3.3.1 组织形态 如图1所示，正常组大鼠肝窦无扩张，
2.5 统计学方法 门管区结构完整，未见纤维组织增生及炎性细胞浸润。
使用 SPSS 26.0 软件进行统计分析。计量资料以 模型组大鼠可见纵横交错的纤维间隔，纤维组织大量增
x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，方差齐性 生，肝小叶紊乱，门管区变宽，大量炎性细胞浸润，少量
时组间两两比较采用 LSD-t 检验，方差不齐时组间两两 肝细胞坏死，肝细胞脂肪变性明显。阳性对照组大鼠肝
比较选择Tamhane-T2检验。检验水准α＝0.05。 脏被膜完整，纤维组织明显增生，纤维间隔内可见炎性
3 结果 细胞浸润。柠檬苦素高剂量组大鼠肝脏被膜完整，肝细
胞轻度脂肪变性，纤维组织少量增生，可见炎性细胞浸
3.1 柠檬苦素对肝纤维化模型大鼠血清肝功能指标的影响
润。柠檬苦素低剂量组大鼠肝脏被膜完整，纤维组织中
与正常组比较，模型组大鼠血清中 ALT、AST 含量
度增生，门管区见明显炎性细胞浸润。与模型组比较，
均显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，阳性对照组和柠
阳性对照组和柠檬苦素低、高剂量组大鼠肝组织纤维增
檬苦素低、高剂量组大鼠血清中 ALT、AST 含量均显著
生程度均有所减轻，炎症程度均有所改善。
降低（P＜0.01）。结果见表1。
3.3.2 纤维化 如图 2 所示，正常组大鼠汇管区观察到
表1 柠檬苦素对肝纤维化模型大鼠血清肝功能指标的
少量蓝色胶原纤维沉积。模型组大鼠可见大量蓝色胶
影响（x±s，U/L）
原纤维沉积，纤维增生明显；与模型组比较，阳性对照组
组别 n ALT AST
正常组 8 4.88±2.14 6.78±2.25 和柠檬苦素低、高剂量组大鼠的蓝色胶原纤维沉积减
模型组 8 56.65±9.30 a 75.80±12.12 a 少，纤维增生程度有所改善。正常组、模型组、阳性对照
阳性对照组 7 19.44±6.05 b 21.10±6.61 b 组和柠檬苦素低、高剂量组大鼠肝纤维化表达的平均光
柠檬苦素高剂量组 7 27.41±4.95 b 16.30±6.58 b
柠檬苦素低剂量组 7 21.74±3.01 b 18.82±2.57 b 密度分别为 0.023±0.009、0.282±0.012、0.198±0.010、
a：与正常组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.01 0.199±0.060、0.191±0.009（n＝3）。与正常组比较，模
3.2 柠檬苦素对肝纤维化模型大鼠血清纤维化指标的影响 型组大鼠肝纤维化表达的平均光密度显著升高（P＜
与正常组比较，模型组大鼠血清中 HA、LN 含量均 0.01）；与模型组比较，阳性对照组与柠檬苦素高剂量组
显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，阳性对照组和柠檬 大鼠肝纤维化表达的平均光密度均显著降低（P＜
苦素低、高剂量组大鼠血清中HA含量均显著降低（P＜ 0.01），柠檬苦素低剂量组大鼠肝纤维化表达的平均光密
0.01），阳性对照组和柠檬苦素高剂量组大鼠血清中 LN 度差异无统计学意义（P＞0.05）。

A.正常组 B.模型组 C.阳性对照组 D.柠檬苦素高剂量组 E.柠檬苦素低剂量组
➡ ：纤维组织
图1 柠檬苦素对肝纤维化模型大鼠肝组织形态变化的影响（HE染色，×200）

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