Page 28 - 《中国药房》2022年24期

表1 SPS对SMMC-7721细胞迁移率的影响（x±s，n＝3）
组别 24 h 48 h
对照组 25.63±0.44 47.16±0.61
SPS低浓度组 23.91±0.32 34.38±0.79 a
SPS中浓度组 15.33±0.18 b 24.19±0.27 a
SPS高浓度组 13.27±0.27 a 16.82±0.23 a
a：与对照组比较，P＜0.01；b：与对照组比较，P＜0.05
A.对照组 B. SPS低浓度组
0.8
0.6
A.对照组 B. SPS低浓度组 细胞克隆形成率/％ 0.4 a a a
0.2
0
对照组 SPS低 SPS中 SPS高
浓度组 浓度组 浓度组
C. SPS中浓度组 D. SPS高浓度组
C. SPS中浓度组 D. SPS高浓度组
→：自噬细胞
a：与对照组比较，P＜0.01
图4 SPS对SMMC-7721细胞克隆形成率的影响 图6 SPS对SMMC-7721细胞自噬影响的显微图
张氏肝细胞以及小鼠肝实质细胞 AML12 为对象，初步
探讨了 SPS 的细胞毒性。结果显示，当 SPS 浓度＞200
μmol/L 时，3 种细胞的活力均低于 90%，故本研究选择
了较为安全的0～200 μmol/L为MTT实验的浓度范围，
并最终筛选出了较敏感的受试细胞（SMMC-7721 细
胞）、干预浓度（20、40、80 μmol/L）和干预时间（48 h）。
本研究结果显示，随 SPS 浓度的增加，SMMC-7721
A.对照组 B. SPS低浓度组
细胞的增殖、迁移、克隆能力均有所减弱。Bcl-2蛋白家
族中包含促凋亡蛋白（如Bax）和抑凋亡蛋白（如Bcl-2），
caspase 蛋白家族则是一组存在于细胞质中的结构相似
的半胱氨酸蛋白酶，二者均与细胞凋亡密切相关 [11―12] 。
当凋亡发生时，Bax、Bcl-2 蛋白表达失衡，表达增加的
Bax蛋白会破坏线粒体膜的完整性，进一步诱导caspase-
C. SPS中浓度组 D. SPS高浓度组 9 的活化，而 caspase-3 亚族则主要负责执行细胞凋亡过
→：凋亡细胞 程 。Western blot实验结果显示，经不同浓度SPS干预
[12]
图5 SPS对SMMC-7721细胞状态影响的显微图
后，细胞中 cleaved caspase-3、caspase-9、Bax 蛋白的相对
3.6 SPS对SMMC-7721细胞自噬的影响 表达量均显著升高，Bcl-2 蛋白的相对表达量均显著降
与对照组比较，SPS 各浓度组细胞内的红色荧光均 低，提示SPS具有促进SMMC-7721细胞凋亡的作用。
有所增强，提示细胞内的自噬水平提升。结果见图6。 细胞凋亡与自噬是细胞程序性死亡的重要表现形
3.7 SPS 对 SMMC-7721 细胞凋亡、自噬及 PI3K/Akt/ 式，在肿瘤的发生发展及治疗过程中具有重要作用，二
mTOR信号通路相关蛋白表达的影响 者可通过独立或互补的关系促进细胞死亡 。本研究
[13]
与对照组比较，SPS各浓度组细胞中cleaved caspase- 采用AO染色法观察细胞自噬情况，结果显示，经不同浓
3、caspase-9、Bax、beclin-1 蛋白的相对表达量和 LC3Ⅱ/ 度 SPS 干预后，细胞自噬水平均有所提升。有研究指

LC3 Ⅰ 均 显 著 升 高（P＜0.05 或 P＜0.01），Bcl-2、p62、 出，p62、LC3和beclin-1为自噬标志性蛋白。其中，新合
PI3K、mTOR、Akt 蛋白的相对表达量均显著降低（P＜ 成的 LC3 存在于细胞质内，以可溶性 LC3Ⅰ形式存在；
0.05 或 P＜0.01），且大部分指标有一定的浓度依赖趋 当细胞自噬发生时，LC3Ⅰ可转化为自噬特异性信号蛋
势。结果见图7。 白LC3Ⅱ，故可通过检测LC3Ⅱ/LC3Ⅰ来反映细胞自噬
4 讨论 水平的高低 。p62 作为运载蛋白可参与多种信号转
[14]
细胞凋亡是一种细胞程序性死亡过程，参与了多种 导，可作为 LC3 与泛素化底物连接的介质，促进 LC3 与
[10]
疾病的发生发展 。本课题组前期以人肝细胞 LO2、人 自噬小体中溶酶体的结合，其表达水平与自噬水平呈负

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