Page 49 - 《中国药房》2022年23期

effectively inhibit the formation of calcium oxalate kidney stones in rats and improve renal damage， the mechanism of which may
be related to the improvement of anti-oxidant effect and the activation of SIRT3/FOXO3a signaling pathway.
KEYWORDS Shilinqing granules； calcium oxalate； kidney stones； renal damage； anti-oxidant； SIRT3/FOXO3a signaling
pathway

肾结石是泌尿系统常见疾病之一，由于生活环境的 Glpbio 公司；兔抗大鼠 SIRT3 多克隆抗体（批号 2627S）
变化及饮食结构的改善，肾结石患病率呈上升趋势 。 购自美国 CST 公司；兔抗大鼠 FOXO3a 多克隆抗体、兔
[1]
我国最近一项调查研究显示，肾结石患病率为 5.8%（男 抗大鼠 SOD2 多克隆抗体（批号分别为 66428、24127）购
性为 6.5%，女性为 5.1%），即每 17 人中就有 1 人患肾结 自武汉三鹰生物技术有限公司。本研究所用引物均由
石 。越来越多的证据表明，炎症、氧化和抗氧化失衡可 武汉赛维尔生物科技有限公司设计合成，具体引物序列
[2]
能在肾结石的发展中起关键作用 [3―5] 。去乙酰化酶 3 及扩增产物长度见表1。
（SIRT3）是存在于线粒体内的一种依赖于烟酰胺腺嘌呤 表1 引物序列及扩增产物长度
二核苷酸（NAD+）的去乙酰化酶，主要调节线粒体功能 基因 引物序列（5′→3′） 扩增产物长度/bp
和相关代谢，可反映能量限制和应激状态；叉头框蛋白 SIRT3 上游引物：TCTGGTATCCCTGCCTCAAAG 108
下游引物：CACGTCAGCCCGTATGTCTTC
O3a（FOXO3a）在线粒体内主要受SITR3的调控，可保护 FOXO3a 上游引物：AACAGTACCGTGTTCGGACC 119
[6]
机体免受氧化应激损伤 。 下游引物：AGTGTCTGGTTGCCGTAGTG
中医范畴内肾结石属“石淋”“尿淋”“砂淋”等，主要 SOD2 上游引物：TCTGGACAAACCTGAGCCCTAA 133
下游引物：GAACCTTGGACTCCCACAGACA
是由于肾虚，膀胱气化不足，湿热蕴结与下焦，气滞血瘀
GAPDH 上游引物：CTGGAGAAACCTGCCAAGTATG 138
而炼液成石 ，其治疗方式兼顾扶正祛邪、益气补肾、清 下游引物：GGTGGAAGAATGGGAGTTGCT
[7]
热通淋 。石淋清颗粒主要由金钱草、海金沙、石韦、王 1.3 实验动物
[8]
不留行等组成，是河南中医药大学第一附属医院的自拟 本研究所用动物为SPF级雄性SD大鼠，共60只，体
方，临床上主要用于促进泌尿系统结石患者排石，可缓 质量（200±20） g，由山东省济南朋悦实验动物繁育有限
解疼痛，缩短排石时间。为进一步了解石淋清颗粒的作 公司提供，动物生产许可证号为 SCXK（鲁）20190003。
用机制，本研究建立草酸钙肾结石大鼠模型，并以 大鼠饲养在河南中医药大学动物实验中心实验室，环境
SIRT3/FOXO3a信号通路为靶点探讨石淋清颗粒预防肾 温度为（20±2） ℃，相对湿度为 50%～60%。本实验已
结石形成的作用机制，以期为其临床应用提供实验基础。 经河南中医药大学动物伦理委员会批准，伦理审查批准
1 材料 号为DWLL202105102。
1.1 主要仪器 2 方法
本研究所用主要仪器有FA20048型电子天平（上海 2.1 分组、造模与给药
精科天美科学仪器有限公司），RM2245 型石蜡切片机 适应性饲养 1 周后，将 60 只大鼠随机分为空白组、
（德国Leci公司），Silver UVI pro型凝胶数字成像分析仪 模型组和石淋清颗粒低、中、高剂量组（6.5、13、26 g/kg，
（英国Uvitec公司），JEM-1400型透射电子显微镜、BX41 低剂量为临床等效剂量）及 SIRT3 抑制剂组（石淋清颗
型扫描电子显微镜（日本 Olympus 公司），KZ-Ⅱ型高速 粒26 g/kg+SIRT3抑制剂25 mg/kg，SIRT3抑制剂的剂量
组织研磨仪（武汉赛维尔生物科技有限公司），Epoch 型 根据预实验结果设置），每组 10 只。参考文献[9]方法，
酶标检测仪（美国 BioTek 公司），CFX 型荧光定量 PCR 除空白组大鼠外，其余各组大鼠将饮水更换为 1% 乙二
仪（美国Bio-Rad公司）。 醇溶液，并每天灌胃 2% 氯化铵溶液 2 mL，连续 4 周，以
1.2 主要药品与试剂 复制草酸钙肾结石大鼠模型。造模同时，给药组大鼠灌
石淋清颗粒由河南中医药大学第一附属医院药剂 胃相应药物，空白组和模型组大鼠灌胃等体积生理盐
科提供；Von Kossa染色试剂盒（批号G1043）购自武汉赛 水，每天 1 次，连续 4 周。实验过程中，空白组和石淋清
维尔生物科技有限公司；苏木素-伊红（HE）染色试剂盒 颗粒中剂量组大鼠无死亡，其余各组均死亡2只大鼠。
（货号 G11120）购自北京索莱宝科技有限公司；活性氧 2.2 大鼠尿液和血清中相关指标的检测
（reactive oxygen species，ROS）试剂盒、丙二醛（malondi‐ 各组大鼠在实验结束前1 d，禁食不禁水，采用代谢
aldehyde，MDA）试剂盒、超氧化物歧化酶（superoxide 收集笼收集每只大鼠 24 h 尿量，以 2 000 r/min 离心 10
dismutase，SOD）试剂盒（货号分别为 E004-1-1、A003-1、 min，取上清液，采用精密 pH 计测定尿液 pH 值，采用铬
A001-1）均购自南京建成生物工程研究所；骨桥蛋白（os‐ 酸钾氧化甲基红催化光度法检测尿液中草酸（oxalic
teopontin，OPN）试剂盒（批号20211026R）购自江苏酶免 acid，Ox）含量，采用全自动生化分析仪检测尿液中 Ca 2+
实业有限公司；SIRT3 抑制剂（批号 GC19013）购自美国 含量。各组大鼠尿液收集后，腹腔注射戊巴比妥钠行麻

中国药房 2022年第33卷第23期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 23 · 2859 ·