Page 36 - 《中国药房》2022年23期

components such as baicalin， succinic acid， baicalein， cryptotanshinone， isoferulic acid， protocatechuic aldehyde. Qingre huoxue
decoction could significantly up-regulate the levels of 15 metabolites including L-arginine， L-arginine， citric acid， glutathione， β-D-
glucose and L-carnitine， and down-regulated the levels of 14 metabolites including arachidonic acid， 3-phosphate-d-glycerol
phosphate， linoleic acid， docosahexaenoic acid， phosphatidylcholine and lysophosphatidylcholine （P＜0.05）. These metabolites
were mainly involved in energy metabolism， inflammatory injury， oxidative stress and autophagy. Results of validation tests
showed that Qingre huoxue decoction could significantly reduce the levels of malondialdehyde， and increased the levels of
superoxide dismutase （except for low-dose group） and glutathione peroxidase significantly （P＜0.05）. CONCLUSIONS Qingre
huoxue decoction can improve the injury of cardiac tissue in MIRI model rats. Its pharmacological components include baicalin，
cryptotanshinone， isoferulic acid， protocatechualdehyde， etc. Furthermore， it may play a protective role in MIRI by improving
myocardial energy metabolism， down-regulating oxidative stress， inhibiting inflammation infiltration.
KEYWORDS Qingre huoxue decoction； myocardial ischemia-reperfusion injury； pharmacological components； mechanism

随着再灌注治疗如经皮冠脉介入术（percutaneous 谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）
coronary intervention，PCI）的普及，急性心肌梗死（acute 试剂盒（货号A005）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）试
myocardial infarction，AMI）的病死率显著降低。然而， 剂盒（货号A003-1）均购自南京建成生物科技有限公司；
随着冠心病患者数量逐年增加，AMI-PCI术后无复流现 多聚甲醛固定液（货号 G1101-500ML）、苏木素-伊红
象 、微 循 环 障 碍 、心 肌 缺 血 再 灌 注 损 伤（myocardial （HE）染液试剂盒（货号 G1003）、TUNEL 试剂盒（货号
ischemia-reperfusion injury，MIRI）等并发症日益突出 。 G1501）均购自武汉赛维尔生物科技有限公司；L-2-氯苯
[1]
广东省名中医吴伟教授基于冠心病热毒血瘀病机所创 丙氨酸（内标，批号C2001，纯度98%）购自上海恒创生物
制的清热活血汤（由毛冬青、黄芩、川芎、赤芍、降香、红 科技有限公司。
花、丹参组成）是广州中医药大学第一附属医院治疗 1.3 动物
AMI-PCI 术后的协定方剂，已广泛运用于临床 20 余年， 本研究所用动物为SPF级雄性SD大鼠，5～7周龄，
疗效确切。为使更多患者获益，医院拟对其进行制剂开 体质量 180～220 g，共 42 只，购自南方医科大学实验动
发及成果转化。本课题组前期研究表明，清热活血汤能 物中心，动物生产许可证号为SCXK（粤）2021-0041。大
改善AMI-PCI术后患者围术期临床症状、短期及远期预 鼠饲养于广州中医药大学第一附属医院SPF级动物房，
后，减少心血管终点事件的发生，且可通过调控自噬改 实验动物的使用遵循3R原则。所有实验操作均获得广
善AMI模型大鼠的心肌组织损伤 [2―4] ，但对MIRI的影响 州中医药大学第一附属医院实验动物伦理委员会的审
及具体机制尚未明确。超高效液相色谱质谱联用（ultra- 批，批准号为TCMF1-2021044。
performance liquid chromatography-tandem mass spec‐ 2 方法
trometry，UPLC-MS）技术具有高通量、高分辨率、高灵敏 2.1 动物分组、造模与给药
度的特点，适用于分析包括难挥发或热稳定性差的代谢 将 SD 大鼠适应性喂养 1 周后，随机分为假手术组，
产物。本研究旨在探讨清热活血汤对MIRI模型大鼠的 模型组，清热活血汤低、中、高剂量组（4.94、9.88、19.79
改善作用，并基于 UPLC-MS 技术分析其药效成分及相 g/kg，参考文献[5]方法进行人鼠等效剂量换算，中剂量
关机制，为后续制剂开发提供思路。 为等效剂量），清热活血汤含药血清组（19.79 g/kg），空白
1 材料 血清组，每组6只。各给药组大鼠灌胃相应药物，空白血
1.1 主要仪器 清组、假手术组、模型组灌胃等量生理盐水，每天1次，连
本研究所用主要仪器有BL-420I型动物信号采集与 续2周。于末次给药12 h后，模型组和清热活血汤各剂
处理系统（成都泰盟科技有限公司），Pannoramic MIDI 量组复制MIRI大鼠模型，假手术组仅穿线不结扎，具体
Ⅱ型数字病理切片扫描仪（济南丹吉尔电子有限公司）， 参考文献[6]进行造模：大鼠腹腔注射 2% 戊巴比妥钠
TGL-16MS型台式高速冷冻离心机（上海卢湘仪离心机 （1.5 mL/kg）进行麻醉，行气管内插管并连接呼吸机辅助
仪器有限公司），LNG-T98型冷冻浓缩离心干燥器（太仓 通气，钝性分离皮下各层肌肉后剪断第3肋骨以暴露心
市华美生化仪器厂），QE型高分辨质谱仪[赛默飞世尔科 脏，在肺动脉圆锥与左心耳交界下2 mm处用带有5-0缝
技（中国）有限公司]；Nexera UPLC 型高效液相色谱仪 合线的圆针进针，对冠脉左前降支近中段行活结结扎
（日本Shimadzu公司）。 （进针深度 2 mm，宽度 3～4 mm）；缺血（左室前壁心肌
1.2 主要药物与试剂 发白、心电图ST段抬高0.1 mV以上为缺血标志）30 min
清热活血汤的中药配方颗粒由广东一方制药有限 后松开活结再灌注90 min，若再灌注时左室前壁缺血心
公司生产，其方剂组成为黄芩 15 g、毛冬青 30 g、丹参 肌部分恢复红润，且心电图 ST 段下降 50% 以上则造模
30 g、赤芍15 g、川芎15 g、降香6 g、红花10 g。戊巴比妥 成功。后续取上述5组大鼠全血及心脏组织进行实验。
钠盐（货号 57330）购自美国 Sigma 公司；超氧化物歧化 空白血清组和清热活血汤含药血清组大鼠不进行MIRI
酶（superoxide dismutase，SOD）试剂盒（货号 A001-1）、 造模，于末次给药2 h后经腹主动脉取血，血样室温静置

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