Page 32 - 《中国药房》2022年23期
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表1 引物序列及扩增产物大小                            聚集指数显著升高（P＜0.01）。与模型对照组比较，妇科断
           引物名称                         引物序列（5′→3′）  扩增产物大小/bp  红饮胶囊组大鼠全血高切相对指数显著升高（P＜0.05），
           EGF      上游引物AGGGCTGAACTATGAAGATGACTG    330       红细胞聚集指数显著降低（P＜0.05）。结果见表3。
                    下游引物TTGTAGCCTCCCTCCGTGTT
           HIF-1α   上游引物ACCGTGCCCCTACTATGTCG        197       表3 各组大鼠血液流变学指标检测结果（x±s，n＝6）
                    下游引物GCCTTGTATGGGAGCATTAACTT               组别         全血高切相对指数 全血低切相对指数  红细胞聚集指数    卡松黏度
           EGFR     上游引物AGAACAACACCCTGGTCTGGAA      180       空白对照组        6.94±1.39  88.77±32.41  9.42±2.02  4.59±0.65
                    下游引物CCACCACTACTATGAAGAGGAGGC              模型对照组        5.42±0.61 a  66.91±3.93 a  13.90±0.89 b  4.76±0.34
           AKT      上游引物CTGGAGGACAACGACTATGGC       215       妇科断红饮胶囊组     6.64±1.01 c  80.80±5.97  11.50±1.32 c  3.96±0.88
                    下游引物AGCCTCTGTGTAGGGTCCTTCTT                  a：与空白对照组比较，P＜0.05；b：与空白对照组比较，P＜0.01；c：
           GAPDH    上游引物CTGGAGAAACCTGCCAAGTATG      138       与模型对照组比较，P＜0.05
                    下游引物GGTGGAAGAATGGGAGTTGCT
                                                              3.3 妇科断红饮胶囊对模型大鼠子宫和卵巢组织病理
          2.6 大鼠子宫组织中EGF、EGFR蛋白表达检测                           形态的影响
              采用 Western blot 法进行检测。取冻存的子宫组织                  3.3.1 子宫HE染色结果 空白对照组大鼠子宫内膜上
          适量，提取组织中总蛋白，采用BCA试剂盒检测总蛋白                           皮完整，间质内各结构清楚、形态正常；模型对照组大鼠
          含量。将蛋白高温变性后上样12%十二烷基硫酸钠-聚                           子宫内膜上皮完整，间质内有大量淋巴细胞及嗜酸性粒
          丙烯酰胺凝胶电泳（电压75 V，时间130 min），然后将蛋                     细胞浸润；妇科断红饮胶囊组大鼠子宫内膜上皮完整，
          白转移（恒流 300 mA）至 PVDF 膜上，以 5% 脱脂奶粉在                  间质内有少量嗜酸性粒细胞浸润。结果见图1。
          室温下封闭2 h，加入相应一抗[β-actin（稀释度为1∶5 000）、
          EGF（稀释度为 1∶1 000）、EGFR（稀释度为 1∶2 000）]，
          4 ℃孵育过夜。次日用 TBST 液洗涤条带 4 次，每次 10
          min，加入二抗（稀释度为 1∶5 000），室温孵育 4 h；TBST
          液洗 4 次，每次 10 min，化学发光法显影。应用 Image J
          1.51软件分析条带灰度值，根据目标蛋白和内参蛋白条
          带灰度值的比值计算目标蛋白的相对表达水平。
          2.7 统计学方法                                                  A.空白对照组                 B.模型对照组
              采用 SPSS 21.0 和 Graphpad Prism 8 软件进行统计
          分析。实验数据以x±s表示，多组间比较采用单因素方
          差分析，方差齐时使用LSD-t法进行组间两两比较，方差
          不齐时使用 Tamhane’s T2 法进行组间两两比较。检验
          水准α＝0.05。
          3 结果
          3.1 妇科断红饮胶囊对模型大鼠一般状态和脏器指数                                            C.妇科断红饮胶囊组
          的影响                                                    注：红色箭头所指表示子宫内膜上皮完整；黑色箭头所指表示淋
              实验过程中各组大鼠的饮食情况均较好。空白对                           巴细胞及嗜酸性粒细胞浸润
          照组大鼠行为活动正常，垫料较干净，阴道口无血迹；模                           图1 各组大鼠子宫组织形态观察结果（HE染色，×100）
          型对照组大鼠状态萎靡，阴道口有血迹，部分大鼠垫料上                           3.3.2 卵巢HE染色结果 空白对照组大鼠卵巢组织结
          也有明显血迹；妇科断红饮胶囊组大鼠行为活动较正常，                           构清楚、形态正常，实质内可见各卵泡及黄体发育正常；
          出血量少，垫料上血迹少。与空白对照组比较，模型对照                           模型对照组大鼠卵巢组织实质内可见各卵泡及黄体发
          组大鼠子宫指数和卵巢指数均显著升高（P＜0.01）；与模                        育正常，静脉增多并大量淤血，卵巢门部可见炎症细胞
          型对照组比较，妇科断红饮胶囊组大鼠子宫指数和卵巢                            浸润；妇科断红饮胶囊组大鼠卵巢组织结构清楚、形态
          指数均显著降低（P＜0.05或P＜0.01）。结果见表2。
                                                              正常，实质内可见各卵泡及黄体发育正常，仅有少量静
          表2 各组大鼠子宫指数和卵巢指数测定结果（x±s，
                                                              脉扩张及淤血。结果见图2。
               n＝6，mg/g）                                      3.4 妇科断红饮胶囊对模型大鼠EGF-EGFR信号通路
           组别                      子宫指数            卵巢指数       相关基因mRNA表达的影响
           空白对照组                   1.78±0.24      0.63±0.04       与空白对照组比较，模型对照组大鼠子宫组织中
           模型对照组                   2.24±0.15 a    0.91±0.20 a
           妇科断红饮胶囊组                1.57±0.20 c    0.70±0.07 b  EGF、HIF-1α、AKT1、EGFR mRNA 相对表达水平均显
             a：与空白对照组比较，P＜0.01；b：与模型对照组比较，P＜0.05；c：           著降低（P＜0.05）。与模型对照组比较，妇科断红饮胶
          与模型对照组比较，P＜0.01                                     囊组大鼠子宫组织中 EGF、HIF-1α、EGFR mRNA 相对
          3.2 妇科断红饮胶囊对模型大鼠血液流变学指标的影响                          表 达 水 平 均 显 著 升 高（P＜0.05 或 P＜0.01）；AKT1
              与空白对照组比较，模型对照组大鼠全血高切相对                          mRNA 相对表达水平有所上升，但差异无统计学意义
          指数、全血低切相对指数均显著降低（P＜0.05），红细胞                       （P＞0.05）。结果见表4。


          · 2842 ·    China Pharmacy  2022 Vol. 33  No. 23                            中国药房  2022年第33卷第23期
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