Page 122 - 《中国药房》2022年23期

2.5.2 色谱条件 色谱柱采用 ACQUITY UPLC BEH 450
400
C18 （100 mm×2.1 mm，1.7 μm）；以0.1%甲酸溶液为流动
350 空白组
相A，乙腈-甲醇（2∶3，V/V）溶液（含0.1%甲酸）为流动相 300 枳壳组
B 进行梯度洗脱（0～1 min，1%B→30%B；1～2.5 min， 体质量/g 250 生佛手组
200
30%B→60%B；2.5～6.5 min，60%B→90%B；6.5～8.5 min， 制佛手组
150
90%B→100%B；8.5～10.7 min，100%B；10.7～10.8 min， 100
0 7 14 21 28 35
100%B→1%B；10.8～15 min，1%B）；流速为0.4 mL/min； t/d
柱温为45 ℃；进样量为1 μL。 A.体质量变化
32
2.5.3 质谱条件 采用电喷雾离子源在正、负离子模式
30
下进行质谱分析。毛细管电离电压为2.5 kV，进样电压 空白组
28
为40 V，碰撞电压为6 eV，离子源温度为115 ℃，氮气温 摄食量/g 26 枳壳组
度为 450 ℃，氮气流速为 900 L/h，质谱扫描范围为 m/z 24 生佛手组
制佛手组
50～1 000 Da。 22
2.6 数据处理与分析 20
0 7 14 21 28 35
采用 SPSS 20.0 软件进行数据统计分析，实验结果 t/d
B.大鼠摄食量变化
满足正态分布时以x±s表示，多组间差异比较采用单因
40
素方差分析，组间两两比较采用 LSD-t 检验（方差齐时）
或 Dunnett’s T3 检验（方差不齐时），检验水准 α＝0.05。 35 空白组
选择大鼠的血清样本采用液相色谱-质谱联用技术进行 饮水量/mL 30 枳壳组
分析，对检测样本的基峰离子流图进行可视化检查，将 生佛手组
25 制佛手组
所有原始数据经代谢组学处理软件进行预处理，得到保
留时间、m/z 和峰强度的数据矩阵。将数据矩阵导入 20 0 7 14 21 28 35
SIMCA 14.0 软件进行主成分分析（principal component t/d
C.大鼠饮水量变化
analysis，PCA）和正交偏最小二乘法-判别分析（orthogonal
图1 大鼠的体质量、摄食量和饮水量变化趋势图
partial least squares-discrimiant analysis，OPLS-DA）。代
表1 各组大鼠尿液量及血清 AQP3 含量的测定结果
谢 物 用 Progenesis QI 软 件 基 于 HMDB（http：//www.
（x±s，n＝6）
hmdb.ca/）、Lipidmaps（https：//www.lipidmaps.org/）公共
尿液量/mL 血清AQP3含量/
数据库及自建数据库进行定性。根据 P 值和代谢物浓 组别
给药第7天 给药第14天 给药第21天 给药第28天 给药第35天 （ng/mL）
度的差异倍数（fold change，FC）筛选差异代谢物，将筛 空白组 11.67±4.23 13.52±3.27 14.58±5.58 15.95±6.74 15.75±6.95 16.30±3.99
选后的差异代谢物映射到 KEGG（https：//www.kegg.jp/ 枳壳组 14.22±5.13 14.90±5.64 9.53±3.04 a 13.18±3.57 12.63±4.58 27.50±6.40 a
kegg/pathway.html）数据库进行通路分析。 生佛手组 10.93±3.09 10.13±1.45 11.17±1.37 11.30±2.06 11.37±2.54 22.47±1.19
制佛手组 12.15±4.46 11.93±2.85 15.98±3.01 b 19.53±7.86 17.48±8.65 17.31±3.24 b
3 结果
a：与空白组比较，P＜0.05；b：与枳壳组比较，P＜0.05
3.1 药物对大鼠体质量、摄食量和饮水量的影响
3.3 大鼠血清代谢组学分析
给药第0～35天，各组大鼠体质量平缓上升，各组之
3.3.1 代谢轮廓分析 采用液相色谱-质谱联用技术对
间差异均无统计学意义（P＞0.05）。制佛手组大鼠的摄
样本进行代谢组学分析，采集正、负离子模式下质控样
食量、饮水量均具有高于枳壳组和生佛手组的趋势，但
本的总离子流图，结果见图2。由图2可知，样品中代谢
差异无统计学意义（P＞0.05）。各组大鼠体质量、摄食 物在较短时间内能被很好地分离。
量和饮水量变化趋势见图1。 3.3.2 PCA 根据 PCA 得分图（图 3）可知，所有质控样
3.2 药物对尿液量及血清AQP3含量的影响 本聚在一起，说明样本及分析过程中仪器稳定性良好，
给药第7、14天，各组大鼠尿液量差异无统计学意义 模型可靠，所得差异代谢物能够反映样本之间的生物学
（P＞0.05）。给药第21天，与空白组比较，枳壳组尿液量 差异。空白组、生佛手组和制佛手组基本分离，表明生、
显著降低（P＜0.05）；与枳壳组比较，制佛手组尿液量显 制佛手给药后均会影响大鼠体内的正常代谢，且佛手炮制
著升高（P＜0.05），且接近空白组。与空白组比较，各给 前后对大鼠体内代谢的影响存在差异。
药组血清 AQP3 含量均有不同程度的升高，枳壳组血清 3.3.3 OPLS-DA 3 组 OPLS-DA 模型中，模型拟合优
AQP3含量较空白组显著升高（P＜0.05）；与枳壳组比较， 度参数 R Y 分别为 1.000、0.991、0.829，预测优度参数 Q 2
2
制佛手组血清AQP3 含量显著降低（P＜0.05），且接近空 分别为 0.928、0.947、0.256。空白组与生佛手组、空白组
2
2
白组。结果见表1。 与制佛手组的 R Y、Q 接近于 1，说明模型有较高的解释
· 2928 · China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 23 中国药房 2022年第33卷第23期