Page 121 - 《中国药房》2022年23期
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佛手为芸香科植物佛手 Citrus medica L. var. sarco‐        科技有限公司；色谱级甲醇、甲酸、乙腈均购自德国
          dactylis Swingle 的干燥果实，具有疏肝理气、和胃止痛、                CNW公司。
          燥湿化痰的功效，用于治疗肝胃气滞、胸胁胀痛、胃脘痞                          1.3 动物
          满、食少呕吐、咳嗽痰多等疾病。《本草便读》记载：“佛                             本研究所用动物为 SPF 级 SD 大鼠，雄性，体质量
          手，理气快膈，惟肝脾气滞者宜之，阴血不足者，亦嫌其                          180～220 g，购自广州中医药大学实验动物中心，动物生
               [1]
          燥耳”，明确指出佛手具有燥性。燥是中药的固有性能                           产许可证号为 SCXK（粤）2013-0034。所有动物均饲养
          之一，具有治疗作用与副作用。其治疗作用指用于治疗                           于广州中医药大学（大学城）实验动物中心 SPF 级动物
          湿证；其副作用指根据“燥性伤阴”的中医理论，认为燥                          房，实验动物使用许可证号为SYXK（粤）2013-0085。
          性干涩，最易伤人津液，临床表现为口干口渴、大便秘                           2 方法
          结、小便短少等症状        [2―3] 。在岭南地区，临床使用的佛手              2.1 制佛手的制备
          饮片多为蒸制后的制佛手，《广东省中药炮制规范》                                称取生佛手饮片 1 kg，淋润蒸馏水（蒸馏水质量为
         （1984 年版）记载佛手的炮制作用为“蒸后降低辛燥                          生佛手饮片质量的20%），隔水蒸制，待圆气后蒸制2.5 h，
               [4]
          之性”。                                               自然冷却至室温取出，于 50 ℃恒温干燥箱烘干，取出，
              科属亲缘关系相近的植物，常含有结构类型相似的                         密封保存，备用 。
                                                                          [4]
          次生代谢产物。因此，研究佛手的燥性，可考虑通过参                           2.2 药液制备
          照其同科属燥性中药枳壳来开展。枳壳源自芸香科柑                                取生佛手饮片 50 g，分别以料液比 1∶20 和 1∶15 加
          橘属植物，现代研究报道枳壳生品具有较强的燥性，会                           入蒸馏水煎煮 2 次，第 1 次 45 min，第 2 次 30 min，合并 2
          对机体的津液造成一定损伤，研究常选用饮水量、排尿                           次煎煮液，水浴加热浓缩至200 mL，得生佛手药液，分装
          量、肾水通道蛋白 3（aquaporin 3，AQP3）含量等作为枳                 后冷冻保存。制佛手、枳壳药液的制备方法同上。
          壳的燥性评价指标        [5―6] 。代谢组学技术在中药炮制相关               2.3 给药与分组
          科研中已有较为广泛的应用，如通过代谢组学研究何首                               根据2020年版《中国药典》，佛手和枳壳每日最大用
                                             [7]
          乌“九蒸九晒”炮制后肝毒性降低的机制 、揭示柴胡醋                          量均为 10 g，根据人与动物之间药物剂量换算关系，以
                                    [8]
          制后增强保肝作用的内在原因 。研究蒸制对佛手药效                           成人 60 kg 为标准体质量计算，大鼠每日给药剂量约为
          的影响，可以先对比考察佛手蒸制前后对机体代谢物的                           1.2 g/kg。佛手性较温和，在前期预实验基础上，本研究
          影响，因为机体的许多生命活动，如能量传递、细胞信号                          将生、制佛手的每日给药剂量均设为正常剂量的 2 倍
          释放、细胞间通信等都会受到代谢物的调控。本研究以                          （2.4 g/kg），枳壳的每日给药量则为正常剂量（1.2 g/kg）。
          枳壳为阳性对照，参考枳壳的燥性评价指标，观察佛手                               将 24 只大鼠随机分为 4 组，分别为空白组、生佛手
          不同饮片对大鼠摄食量、饮水量、尿液量、AQP3 等燥性                        组、制佛手组、枳壳组，每组6只。适应性喂养1周后，给
          指标的影响，以探究佛手致燥的特点；同时，采用代谢组                          药组大鼠分别灌胃相应药液（相当于生佛手2.4 g/kg、制
          学技术，寻找生、制佛手给药干预后大鼠体内潜在的差                           佛手 2.4 g/kg、枳壳 1.2 g/kg），空白组大鼠灌胃等体积蒸
          异代谢物及代谢通路，以期为佛手蒸制前后药效变化研                           馏水，连续35 d。每日记录大鼠摄食量、饮水量，分别于
          究提供科学思路。                                           给药第0、7、14、21、28、35天记录一次体质量并收集大鼠
          1 材料                                               尿液。至第35天末次给药后麻醉，腹主动脉取血，冷冻
          1.1 主要仪器                                           离心，取上层血清，保存于－80 ℃备用。
              本研究所用的主要仪器有 TGL-16MS 型台式高速                     2.4 大鼠血清AQP3的检测
          冷冻离心机（上海卢湘仪离心机仪器有限公司），SB-                              采用 ELISA 法检测。取“2.3”项下血清样品，以酶
          5200DT 型超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限                        标仪于 450 nm 波长处测定各孔的光密度（OD）值，并计
          公司），ACQUITY UPLC Ⅰ-Class型超高效液相色谱仪、                 算其中AQP3的含量。操作过程严格按照试剂盒说明书
          VION IMS Q-TOF 型高分辨质谱仪（美国 Waters 公司），              操作。
          UPH型台上式超纯水机（四川优普超纯科技有限公司）。                         2.5 代谢组学分析
          1.2 主要药品与试剂                                        2.5.1 代谢组学样本制备 取“2.3”项下血清样品，室温
              生佛手饮片（批号171101）、枳壳饮片（批号170505）                 下解冻后取 100 μL 血清，加入 10 μL 内标（L-2-氯苯丙
          均购自广州至信药业股份有限公司，经广州中医药大学                           氨酸，质量浓度为0.3 mg/mL，甲醇配制），涡旋振荡10 s，
          中药学院陈康教授鉴定为真品，分别来自芸香科植物佛                           再加入300 μL的蛋白沉淀剂甲醇-乙腈（2∶1，V/V），涡旋
          手C. medica L. var. sarcodactylis Swingle的干燥果实、芸    振荡 1 min，冰水浴中超声提取 10 min，－20 ℃下静置
          香科植物酸橙 Citrus aurantium L. 或其栽培变种的干燥               30 min，在 4 ℃条件下以 13 000 r/min 冷冻离心 15 min，
          未成熟果实。AQP3试剂盒（批号201809）购自大连美仑                      取上层清液，即得样本提取液。质控样本由所有样本的
          生物技术有限公司；L-2-氯苯丙氨酸购自上海恒创生物                         提取液取适量等体积混合制备而成。


          中国药房  2022年第33卷第23期                                              China Pharmacy  2022 Vol. 33  No. 23    · 2927 ·
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