Page 68 - 《中国药房》2022年20期

associated with reducing the levels of inflammatory factors and inhibiting the activation of TLR4/NF-κB signaling pathway.
KEYWORDS Chaihu xianxiong decoction；containing serum；high-fat serum；endothelial cells；inflammatory reaction；Toll-like
receptor 4/nuclear factor-κB pathway

冠心病心绞痛是一种临床常见疾病，由动脉粥样硬 中医药大学第一附属医院药品质量控制小组鉴定均为
化（atherosclerosis，AS）和冠状动脉功能改变（痉挛）引 真品。
起，其发病率和病死率呈逐年上升趋势，严重危害人民 MTT试剂盒（批号C0009S）购自上海碧云天生物科
生命健康 [1―2] 。柴胡陷胸汤由小柴胡汤和小陷胸汤二方 技有限公司；人肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α，
加减而成，组方药材包括柴胡、法半夏、黄芩、黄连、瓜 TNF-α）、白细胞介素 6（interleukin-6，IL-6）、内皮型一氧
蒌、木香、九香虫、丹参、甘草。该方可减轻冠心病心绞 化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）、一氧
[3]
痛患者疼痛发作次数、程度，并缩短疼痛持续时间 ，但 化氮（nitric oxide，NO）、内皮素 1（endothelin-1，ET-1）酶
其作用机制尚不明确。 联 免 疫 吸 附 测 定 试 剂 盒（批 号 分 别 为 ml077385、
血管内皮功能障碍与冠心病心绞痛的发生、发展密 ml028583、ml025095、ml063651、ml025101）均购自上海
切相关，炎症和血脂异常则是导致该疾病进展的重要因 酶联生物科技有限公司；Trizol 试剂购自美国 Thermo
素 [4―5] 。据报道，冠心病心绞痛患者存在明显的血脂高、 Fisher Scientific 公司；兔源 TLR4、NF-κB p65、磷酸化
血管损伤和炎症因子表达异常等症状 [6―7] ，且Toll样受体4 NF-κB p65（p-NF-κB p65）、β-肌动蛋白（β-actin）抗体和
（Toll-like receptor 4，TLR4）/核 因 子 κB（nuclear factor- 辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔免疫球蛋白G二抗（批
[8]
κB，NF-κB）通路被激活 ；而抑制 TLR4/NF-κB 炎症通 号分别为ab13556、ab16502、ab76302、ab8227、ab205718）
路的过度活化可减轻血管炎症和 AS，并改善血脂水 均 购 自 英 国 Abcam 公 司 ；兔 源 NF- κB 抑 制 因 子 α
[9]
平 。有研究指出，柴胡陷胸汤中的多种中药及其主要 （nuclear factor κB inhibitor α，IκBα）、磷 酸 化 IκBα
成分均具有降血脂、抗炎、保护血管内皮细胞的作用，并 （p-IκBα）抗体（批号分别为 A19714、AP0614）均购自武
汉爱博泰克生物科技有限公司；细胞间黏附分子1（inter‐
可抑制 TLR4/NF-κB 炎症通路的活化 [10―12] ，但该方对冠
心病心绞痛的保护作用是否与改善血管内皮功能障碍、 celluar adhesion molecule-1，ICAM-1）、转化生长因子 β1
（transforming growth factor-β1，TGF-β1 ）、甘油醛-3-磷酸脱
抑制炎症反应有关尚未见报道。
氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）
中药血清药理研究方法是近年来倍受学界关注的
引物均由广州锐博生物科技有限公司设计、合成（引物
中药体外药理实验研究方法，以含药血清进行体外实验
序列与产物大小见表1）。其余试剂均为分析纯，水为双
可排除中药复方及粗提物成分、电解性能、渗透压、酸碱
蒸水。
度等因素的影响，并与药物在体内发挥药理学效应的真
表1 ICAM-1等引物序列和产物大小
实过程较为接近，故可准确、真实地反映中药的整体作
基因 引物序列 产物大小/pb
用及潜在机制。基于此，本研究拟采用高脂血清诱导内 ICAM-1 上游引物：5′-TGGGCAAGAACCTTACCCTACG-3′ 128
皮细胞损伤，探究柴胡陷胸汤含药血清对血管内皮细胞 下游引物：5′‐TTCAGTGCGGCACGAGAAATT‐3′
上游引物：5′-TTCCTGGCGATACCTCAGCAACC-3′ 150
损伤的影响，旨在为阐明其治疗冠心病心绞痛的作用机 TGF-β 1
下游引物：5′‐CGCTAAGGCGAAAGCCCTCAAT-3′
制提供参考。 GAPDH 上游引物：5′‐GAGTCAACGGATTTGGTCGT‐3′ 96
1 材料 下游引物：5′‐TTGATTTTGGAGGGATCTCG‐3′
1.1 主要仪器 1.3 实验动物与细胞
本研究所用主要仪器包括 Modular P800 型全自动 12 只 SPF 级雄性新西兰兔，6 月龄，体质量 3.0～3.2
生化分析仪（瑞士Roche公司），HERAcell 240i型CO2细 kg，购自山东艾莱克生物科技有限公司，实验动物生产
胞培养箱（美国Thermo Fisher Scientific公司），iMark680 许可证号为 SCXK（鲁）2019-0006；24 只雄性 SD 大鼠，
型多功能酶标仪、蛋白转膜装置（电泳仪、转膜槽）、 7～8 周龄，体质量（210±10）g，购自济南朋悦动物繁育
Quantity One-v 4.6.2型凝胶图像分析软件（美国Bio-Rad 有限公司，实验动物生产许可证号为 SCXK（鲁）2019-
®
公 司），ABI Prism 7300 型 荧 光 定 量 聚 合 酶 链 反 应 0003。所有实验动物均饲养在（21±1）℃、每 12 h 昼夜
（PCR）仪（美国ABI公司）等。 交替的动物房内。动物实验方案经医院伦理委员会批
1.2 主要药品与试剂 准（批 件 号 IACUC-G14002）。 人 脐 静 脉 内 皮 细 胞
柴胡、法半夏、黄芩、黄连、瓜蒌、木香、九香虫、丹 ECV304（货号 CC-Y1151）购自上海雅吉生物科技有限
参、甘草药材均购自北京同仁堂制药有限公司，由湖南 公司。

·2494· China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 20 中国药房 2022年第33卷第20期