Page 53 - 《中国药房》2022年20期

定，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇30 mL，密塞，称定 1.00%、1.85%、0.49%（n＝6），表明方法精密度良好。
质量，超声（功率250 W，频率40 kHz）处理30 min，放冷， 2.6 稳定性试验
再次称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取 取“2.2.2”项下供试品溶液（编号S1），分别于室温下
续滤液，即得。 放置 0、2、4、6、8、10、12、24 h 时按“2.1”项下色谱条件进
2.3 系统适用性试验 样测定，记录峰面积。结果显示，3-O-乙酰坡模醇酸、白
取上述混合对照品溶液、供试品溶液（编号 S1）、空 桦脂酸、齐墩果酸、熊果酸、3-O-乙酰熊果酸峰面积的
白对照溶液（甲醇），按“2.1”项下色谱条件进样测定，记 RSD分别为0.35%、2.71%、1.66%、0.90%、1.09%（n＝8），
录色谱图，详见图1（空白对照溶液图略）。由图1可知， 表明供试品溶液于室温下放置24 h内稳定性良好。
3-O-乙酰坡模醇酸等 5 种成分的分离效果较好，分离度 2.7 重复性试验
均大于1.5，空白对照溶液对测定无干扰。 精密称取木瓜药材样品（编号 S1）粉末 1.0 g，共 6
275 份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下
250 4
225 色谱条件进样测定，记录峰面积并按外标法计算样品含
200 3
175 量。结果显示，3-O-乙酰坡模醇酸、白桦脂酸、齐墩果
mAU 150 1 酸、熊果酸、3-O-乙酰熊果酸含量的 RSD 分别为 1.97%、
125
100
75 2 5 2.86%、2.19%、0.94%、2.14%（n＝6），表明方法重复性
50
25 良好。
0
2.8 加样回收率试验
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
t/min 精密称取已知含量的木瓜药材样品（编号 S1）粉末
A.混合对照品溶液
275 50 mg，共 6 份，分别加入一定量的混合对照品溶液，按
250
225 “2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条
200 4
175 件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率。结果显
mAU 150 示，3-O-乙酰坡模醇酸、白桦脂酸、齐墩果酸、熊果酸、3-
125
100
75 3 5 O-乙酰熊果酸的平均加样回收率分别为 100.47%、
50
25 1 2 100.16%、98.29%、101.38%、98.40%，RSD 分别为0.90%、
0
2.07%、0.41%、1.67%、1.56%（n＝6）。
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
t/min 2.9 QAMS法相对校正因子的确定
B.供试品溶液
1：3-O-乙酰坡模醇酸；2：白桦脂酸；3：齐墩果酸；4：熊果酸；5：3- 2.9.1 相对校正因子的计算 取“2.2.1”项下混合对照
O-乙酰熊果酸 品溶液，按“2.1”项下色谱条件分别进样1、2、5、10、20 μL，
图1 3-O-乙酰坡模醇酸等成分混合对照品溶液、供试 以齐墩果酸（含量较高且对照品易得）为内参物，按下式
品溶液的HPLC图 计算齐墩果酸相对于其他成分的相对校正因子（fsi ）：fsi＝
2.4 线性关系考察 （As/Cs ）/（Ai/Ci ）（式中，As为内参物峰面积，Cs为内参物质
取“2.2.1”项下混合对照品溶液适量，分别用甲醇稀 量浓度，Ai为待测成分色谱峰峰面积，Ci为待测成分质量
[5]
释1、5、10、15、20倍，得系列线性溶液。取上述各线性溶 浓度 ）。结果显示，3-O-乙酰坡模醇酸、白桦脂酸、熊果
液及混合对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定， 酸、3-O-乙酰熊果酸的平均相对校正因子分别为 1.281、
记录峰面积。以待测成分质量浓度为横坐标（X）、峰面 1.641、1.261、1.408，RSD 分 别 为 2.090%、2.280%、
积为纵坐标（Y）进行线性回归，具体结果见表2。 1.250%、1.040%（n＝5），表明各成分相对校正因子的准
表2 3-O-乙酰坡模醇酸等成分的回归方程和线性范围 确性较好。
待测成分 回归方程 R 2 线性范围/（μg/mL） 2.9.2 耐用性考察 取“2.2.1”项下混合对照品溶液，按
3-O-乙酰坡模醇酸 Y＝157.610X+0.049 0.999 9 4.06～81.2 “2.1”项下色谱条件进样，记录峰面积，考察不同色谱仪
白桦脂酸 Y＝126.630X+0.006 0.999 5 2.12～42.4 （DIONEX Ultimate 3000 型 HPLC 仪、岛津 LC-20A 型
齐墩果酸 Y＝200.510X+0.293 0.999 9 9.62～192.3
熊果酸 Y＝163.810X+0.032 0.999 7 7.77～155.4 HPLC仪）、色谱柱[Ultimate XB Cl8、Cosmosil C18-MS-Ⅱ、
3-O-乙酰熊果酸 Y＝148.150X－0.092 0.999 8 4.21～84.1 SPOLAR C18 （规格均为250 mm×4.6 mm，5 μm）]对相对
2.5 精密度试验 校正因子的影响。结果显示，3-O-乙酰坡模醇酸、白桦
精密吸取“2.2.2”项下供试品溶液（编号 S1），按 脂酸、熊果酸、3-O-乙酰熊果酸的平均相对校正因子分
“2.1”项下色谱条件连续进样6次，记录峰面积。结果显 别 1.286、1.630、1.252、1.413，RSD 均小于 3%（n＝5）,表
示，3-O-乙酰坡模醇酸、白桦脂酸、齐墩果酸、熊果酸、3- 明不同色谱仪及色谱柱对3-O-乙酰坡模醇酸等4种成分
O- 乙 酰 熊 果 酸 峰 面 积 的 RSD 分 别 为 2.65%、2.90%、 的相对校正因子无明显影响，该方法耐用性良好。

中国药房 2022年第33卷第20期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 20 ·2479·