Page 47 - 《中国药房》2022年19期
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法灌胃等体积水。第 6 天给药后 1 h，除正常对照组外，                      2.7  大鼠踝关节组织中 TXNIP/NLRP3 信号通路相关
          其余各组大鼠均参照文献[10―11]方法复制痛风性关节                        蛋白的表达水平检测
          炎模型：采用 1 mL 注射器，于大鼠后肢右踝关节背侧                            取大鼠右后踝关节组织适量，加入预冷的裂解液于
          45°方向沿胫骨肌腱内侧插入至关节腔，注入25 mg/mL尿                     冰上进行匀浆，离心后取上清液，采用BCA法检测蛋白
          酸钠混悬液 50 μL。正常对照组同法注射等体积 0.9%                      浓度。蛋白经变性后进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺
          氯化钠溶液。第7天给药后（即末次给药后）1 h，腹腔注                        凝胶电泳，转膜，室温封闭，洗膜，加入 TXNIP、NLRP3、
          射1%戊巴比妥钠（40 mg/kg）麻醉大鼠，取血，取材进行                     ASC、β-actin一抗（稀释度均为1∶500），4 ℃孵育过夜；洗
          后续检测。                                              膜，加入二抗（稀释度为 1∶1 000），室温孵育 2 h。采用
          2.2 大鼠关节肿胀度的检测                                     ECL法显色，经凝胶成像仪拍照后，采用Image J软件分
              采用足趾容积测量仪检测各组大鼠造模后2、6、24 h                     析目的蛋白灰度值，以目的蛋白条带与内参蛋白（β-actin）
          的关节肿胀度，各时间点重复测量2 次后取平均值。关                          条带的灰度值比值表示目的蛋白的表达水平。
          节肿胀度（mL）＝造模后各时间点足趾容积―造模前足                          2.8 统计学方法
          趾容积。
                                                                 采用SPSS 21.0软件进行统计分析。数据以x±s表
          2.3 大鼠关节炎症指数评分的检测
                                                             示，多组间比较使用单因素方差分析，组间两两比较采
              大鼠造模后 2、6、24 h，各组大鼠参照文献[10,12]进
                                                             用LSD-t检验。检验水准α＝0.05。
          行关节炎症指数分级评定：0分为正常；1分为关节皮肤                          3 结果
          轻度红肿，骨性标志可见；2 分为关节明显红肿，骨性标
                                                             3.1 大鼠关节肿胀度及炎症指数评分检测结果
          志消失，但局限于关节部位；3 分为关节及以外肢体
                                                                 关节肿胀度结果显示，与正常对照组比较，模型组
          肿胀。
                                                             大鼠造模 2 h 后，关节肿胀度显著升高（P＜0.01），且在
          2.4  大鼠血清中氧化应激相关指标活性及炎症因子水
                                                             造模 6 h 后达到高峰并持续至 24 h。与模型组比较，苏
          平的检测
                                                             萸痛风方各剂量组大鼠在造模 2 h 后，关节肿胀度均显
              末次给药1 h后，各组大鼠麻醉后腹主动脉取血，以
                                                             著降低（P＜0.05或P＜0.01），苏萸痛风方中剂量组药物
          3 000 r/min 离心 10 min，取上清液，采用紫外-可见分光
                                                             作用时间持续至 6 h，苏萸痛风方高剂量组药物作用时
          光度法测定血清中氧化应激指标SOD、XOD、MDA的活
                                                             间持续至24 h，具有一定剂量依赖趋势。炎症指数评分
          性，采用 ELISA 法测定血清中炎症因子 IL-1β、IL-18、
          TNF-α的水平。                                          结果显示，与正常对照组比较，模型组大鼠造模 2、6、24
          2.5  大鼠踝关节组织中ROS水平的测定                              h 后，炎症指数评分均显著升高（P＜0.01），关节红肿明
              取大鼠右后踝关节组织适量，剪碎，用预冷的生理                         显，骨性标志消失。与模型组比较，苏萸痛风方高、中剂
          盐水冲洗后，加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。收                           量组大鼠炎症指数评分均显著降低（苏萸痛风方中剂量
          集组织匀浆，以 300 目尼龙网过滤，滤液以 800 r/min 离                 组造模 24 h 后除外，P＜0.01 或 P＜0.05），关节红肿减
          心2 min，收集沉淀细胞；将沉淀细胞以磷酸盐缓冲液重                        轻；秋水仙碱片组大鼠各时间点的关节肿胀度和炎症指
          悬，取部分悬液进行蛋白定量分析后，再按试剂盒说明                           数评分均显著降低（P＜0.01）。结果见表1。
          书相关方法检测大鼠踝关节组织中 ROS 水平（以 ROS                       3.2  大鼠踝关节组织的病理形态学观察结果
          荧光强度与蛋白含量的比值表示）。                                       与正常对照组比较，模型组大鼠滑膜组织增厚，炎
          2.6  大鼠踝关节组织的病理形态学观察                               症细胞数量增加，提示炎症和水肿形成。与模型组比
              取大鼠右后踝关节组织，以4%多聚甲醛溶液固定，                        较，秋水仙碱片组大鼠滑膜组织未明显增厚及水肿，炎
          经 20% 的乙二胺四乙酸溶液脱钙后使用梯度乙醇进行                         症细胞数量明显减少；苏萸痛风方各剂量组大鼠滑膜组
          脱水、石蜡包埋、切片、苏木精-伊红（HE）染色，于倒置显                       织厚度降低，炎症细胞数量减少，说明苏萸痛风方能减
          微镜下观察大鼠踝关节组织的病理形态学改变。                              轻大鼠踝关节滑膜组织的炎症。结果见图1。
                      表1 各组大鼠造模后不同时间点的关节肿胀度和炎症指数评分测定结果（x±s，n＝10）
                                    2 h                          6 h                         24 h
          组别
                           关节肿胀度/ mL     炎症指数评分         关节肿胀度/mL      炎症指数评分         关节肿胀度/mL      炎症指数评分
          正常对照组            0.094±0.032     0.3±0.5      0.114±0.053    0.2±0.4       0.034±0.029    0.1±0.3
          模型组              0.486±0.089 a   1.7±0.5 a    0.541±0.102 a  2.2±0.4 a     0.505±0.106 a  1.8±0.4 a
          秋水仙碱片组           0.291±0.053 b   0.8±0.4 b    0.342±0.073 b  0.9±0.6 b     0.272±0.058 b  0.5±0.5 b
          苏萸痛风方高剂量组        0.343±0.089 b   1.1±0.3 b    0.418±0.092 c  1.4±0.5 c     0.385±0.071 b  1.2±0.6 b
          苏萸痛风方中剂量组        0.373±0.099 c   1.3±0.5 c    0.437±0.081 c  1.6±0.5 c     0.403±0.097    1.4±0.5
          苏萸痛风方低剂量组        0.397±0.094 c   1.4±0.5      0.454±0.082    1.9±0.3       0.441±0.076    1.7±0.5
             a：与正常对照组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.01；c：与模型组比较，P＜0.05


          中国药房    2022年第33卷第19期                                            China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 19  ·2345·
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