Page 51 - 《中国药房》2022年19期

groups（P＜0.01）；the content of GSH in administration groups and the activity of SOD in purified product of phenolic acids
group，protocatechuic aldehyde group and rosmarinic acid group were increased significantly（P＜0.01）. The protein expressions of
Nrf2，HO-1 and NQO1 in purified product of phenolic acids group as well as the protein expression of Nrf2 in rosmarinic acid
group were up-regulated significantly （P＜0.01），while the protein expression of Keap1 was down-regulated significantly in
purified product of phenolic acids group and rosmarinic acid group（P＜0.01）. CONCLUSIONS The phenolic acids components
from S. deserta Schang can relieve oxidative stress injury of renal tubular epithelial cells induced by high glucose and high fat，the
mechanism of which may be associated with activating Keap1/Nrf2 signaling pathway and inhibiting oxidative stress response.
KEYWORDS Salvia deserta Schang；phenolic acid；human renal tubular epithelial cells HK-2；oxidative injury；Kelch-like

ECH-associated protein 1；nuclear erythroid 2-related factor 2

糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）是糖尿病所 （美国Bio-Rad公司）、Epoch型酶标检测仪（美国Bio-Tek
致的慢性肾脏病变，病变可累及全肾（包括肾小球、肾小 公司）。
管、肾间质等）。我国约有 20%～40% 的糖尿病患者合 1.2 主要药品与试剂
[1]
并 DN，其已成为终末期肾病的主要原因 。有研究表 新疆鼠尾草药材于2016年10月采于新疆乌鲁木齐
明，持续高糖和高脂环境可以诱导肾小管损伤，而肾小 市水磨沟区，经新疆医科大学药学院王晓梅副教授鉴定
管损伤在 DN 的发展过程中发挥重要的作用 [2―3] 。氧化 为唇形科鼠尾草属新疆鼠尾草S. deserta Schang的根及
应激被认为是 DN 发生发展中的关键因素，Kelch 样 根茎。卡格列净片（批号H20170375，规格100 mg/片）购
ECH 相关蛋白 1（Kelch-like ECH-associated protein 1， 自 西 安 杨 森 制 药 有 限 公 司 ；丹 参 素 对 照 品（批 号
Keap1）/核转录因子 E2 相关因子 2（nuclear erythroid 2- 628B021，纯度98%）、原儿茶醛对照品（批号1228A024，
related factor 2，Nrf2）信号通路是机体内调节氧化反应 纯度98%）、咖啡酸对照品（批号806D022，纯度98%）、全
的重要通路，该通路激活后可以提高细胞抗氧化能力， 蛋白提取试剂盒和 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-
[4]
减轻肾脏氧化应激损伤，从而发挥对肾脏的保护作用 。 PAGE）凝 胶 制 备 试 剂 盒（批 号 分 别 为 20200109、
新疆鼠尾草 Salvia deserta Schang 是唇形科鼠尾草 20201205）购自北京索莱宝科技有限公司；迷迭香酸对
属植物，在新疆广泛分布。本课题组前期研究显示，新 照品（批号Y06A9K67402，纯度98%）购自上海源叶生物
疆鼠尾草总酚酸提取物（总酚酸含量为 40.97%）具有改 科技有限公司；MEM 培养基购自美国 Gibco 公司；胰蛋
善糖尿病模型大鼠肾脏损伤，减轻其肾脏氧化应激和炎 白酶、双抗购自以色列 BI 公司；超氧化物歧化酶（super‐
症反应的作用 [5―6] 。此外，本课题组前期还从新疆鼠尾 oxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽（glutathione，GSH）、丙
草总酚酸提取物中分离得到了丹参素、原儿茶醛、咖啡 二 醛（malondialdehyde，MDA）试 剂 盒（批 号 分 别 为
[7]
酸及迷迭香酸等代表性酚酸类单体成分 。为进一步阐 20200603、20200603、20200527）均购自南京建成生物工
明新疆鼠尾草酚酸提取物及其化学成分改善DN的作用 程研究所；FITC 偶联 Annexin-Ⅴ凋亡检测试剂盒（批号
机制，本课题组拟制备酚酸类成分含量更高的新疆鼠尾 0027279）购自美国BD公司；兔抗Nrf2、Keap1、血红素氧
草酚酸纯化物，并以人肾小管上皮细胞 HK-2 为研究对 合酶 1（heme oxygenase-1，HO-1）、醌 NADH 脱氢酶 1
象，建立高糖高脂损伤HK-2细胞模型，初步探讨新疆鼠 （NADH：quinone acceptor oxidoreductase 1，NQO1）、β-肌
尾草酚酸纯化物及上述4个代表性酚酸类单体成分对高 动蛋白（β-actin）一抗购自美国 Proteintech 公司；辣根过
糖高脂损伤模型细胞的存活率、氧化应激相关因子以及 氧化物酶标记的抗兔免疫球蛋白G（IgG）二抗购自美国
Keap1/Nrf2信号通路相关蛋白表达的影响，以期为新疆 CST公司；PVDF膜购自美国Milipore公司；其余试剂均
鼠尾草防治DN提供理论基础和实验依据。 为分析纯或实验室常用规格，水为纯化水。
1 材料 1.3 细胞

1.1 主要仪器 本研究所用人肾小管上皮细胞HK-2购自武汉普诺
本研究所用主要仪器有AE240型分析天平[梅特勒- 赛生命科技有限公司。
托利多仪器（上海）有限公司]、3-18KS 型高速低温离心 2 方法
机（美国 Sigma 公司）、Leitz Optilux 型数码显微镜（德国 2.1 新疆鼠尾草酚酸纯化物的制备
Leica 公司）、FluorChem E 型化学发光成像系统（美国 根据文献[8]方法制备新疆鼠尾草酚酸提取物，将提
Protein Simple 公司）、Mini-PROTEAN Tetra Cell 系统 取物以上样质量浓度为40 mg/mL、上样体积为40 mL进

中国药房 2022年第33卷第19期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 19 ·2349·