Page 28 - 《中国药房》2022年17期

4 讨论
CI/R损伤是一种复杂的级联性病理生理过程，其发
生机制尚未完全明确。CI/R 引起的脑损伤涉及多种生
物过程，如炎症反应、氧化应激、线粒体功能调节和血管
内皮功能调节等 [15－17] 。本研究为阐明 KAE 治疗脑卒中
的作用机制，通过网络药理学研究和分子对接筛选出了
KAE的主要作用靶点，随后用细胞和动物实验验证了筛
选的结果。
本网络药理学研究结果显示，KAE 可能作用于
PTGS2、MMP9、JUN、Akt1、TNF、CASP3、MAPK8、
ICAM1、VCAM1、Src 10 个核心靶点，从而发挥其治疗
CI/R 损伤的作用。分子对接结果表明，KAE 与 10 个核
心靶点的结合亲和力均较低，提示 KAE 与靶点结合稳
定。KAE 与 PTGS2、MMP9、JUN、Akt1、TNF、CASP3、
MAPK8、ICAM1、VCAM1、Src 10 个核心靶点的结合位
Sham组 MCAO组 KAE组
点分别有 5、4、4、2、3、5、4、5、5、4 个，主要包括 ALA、
图6 各组大鼠脑组织的TTC染色图
SER、TYR、MET、LYS 等，提示 KAE 可通过与核心靶点
多位点结合发挥作用，这与中医的“多靶点、多通路”治
Akt 60 kDa
疗疾病理论相呼应。其中，KAE 与核心靶点 Akt、Src 的
结合能均不高于－9.0 kcal/mol，提示KAE可能通过作用
p-Akt 60 kDa
于Akt、Src发挥治疗作用。
Sre 55 kDa 以往网络药理学研究结果显示，在血管内皮功能调
节方面，KAE 通过作用于 Akt1、MMP9、Src、MAPK8 等
p-Sre 55 kDa 靶点，调控血管内皮生长因子、松弛素等信号通路进而
调节血管内皮功能。Src 是一种非受体蛋白酪氨酸激
GAPDH 36 kDa
酶，在缺血脑组织中可调节细胞外信号调节激酶，继而
[18]
Sham组 MCAO组 KAE组 发挥脑保护作用 。在脑缺血后再灌注初期，Src可通过
A.电泳图
调节闭锁连接蛋白 1 和血管生成素 1 的表达，影响血管
1.5 通透性，从而介导脑损伤 。下调Src蛋白磷酸化水平，
[19]
抑制 Src 家族激酶信号通路激活，可发挥 CI/R 保护作
1.0 b [20]
p-Akt/Akt a 用 。 本 研 究 结 果 表 明 ，OGD/R 损 伤 HT22 细 胞 及

0.5 MCAO模型大鼠脑组织中Src蛋白的磷酸化水平均显著
降低，表明 CI/R 损伤可能导致 Src 失活，引发脑组织损
0 伤；给予 KAE 能够显著升高 OGD/R 损伤 HT22 细胞及
Sham组 MCAO组 KAE组
MCAO 模型大鼠脑组织中 Src 蛋白的磷酸化水平，提示
B. KAE对MCAO模型大鼠脑组织中Akt蛋白磷酸化的影响
Scr可能是发挥脑保护作用的重要靶点。
1.5
磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol 3 kinase，
PI3K）-Akt是维持机体细胞正常生理活动的关键信号通
1.0 b
p-Src/Src a 路，广泛存在于脑组织中，其中 Akt 作为 PI3K 的下游蛋
[21]
0.5 白，可调节细胞增殖、生长和存活 。激活 PI3K-Akt 通
路后可通过减少氧化应激、抑制炎症细胞因子表达、减
0 少细胞凋亡，从而改善 CI/R 造成的脑损伤。研究表明，
Sham组 MCAO组 KAE组
C. KAE对MCAO模型大鼠脑组织中Src蛋白磷酸化的影响 激活 PI3K-Akt 通路可抑制 OGD/R 诱导的 HT22 细胞活
[22]
a：与Sham组比较，P＜0.05；b：与MCAO组比较，P＜0.05 性氧的产生，减轻氧化应激 。另外，激活 PI3K-Akt-核
图 7 KAE 对 MCAO 模型大鼠脑组织中 Akt、Src 蛋白 因子E2相关因子2信号转导可减轻CI/R损伤诱导的神
磷酸化的影响 经炎症和氧化应激 。本研究结果表明，OGD/R 损伤
[23]

·2070 · China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 17 中国药房 2022年第33卷第17期