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1 材料                                               半制备液相（54％甲醇-水）纯化后得到化合物4（6 mg），
        1.1 主要仪器                                           经LC-16P半制备液相（85％甲醇-水）纯化后得到化合物
            本研究所用的主要仪器包括 Bruker-400 型超导核                   1（8 mg）。采用 ODS 柱对 A3 组分进行色谱分离，采用
        磁共振（NMR）光谱仪（德国 Bruker 公司），SEP-LC52                 TLC 分析，合并相同成分后共得到 11 个组分（Aa3-1～
        MWD 型紫外检测器（赛谱锐思北京科技有限公司），                          Aa3-11）。组分Aa3-4经LC-16P半制备液相（67％甲醇-
        LC-16D 半制备型高效液相色谱（HPLC）仪、RID-20A 型                 水）纯化后得到化合物9（8 mg）；组分Aa3-6经聚苯乙烯
        示差折光检测器（日本Shimadzu公司），AAPI 3200型质                  基反相树脂填料（MCI）柱色谱分离后得到化合物 10（5
        谱（MS）仪（美国 Sciex 公司），Multiskan GO 型全波长酶             mg）；组分Aa3-7经硅胶柱纯化后得到化合物11（3 mg）；
        标仪（美国Thermo Fisher Scientific公司）等。                 组分 Aa3-8 先用 ODS 柱进行色谱分离，采用 TLC 分析，
        1.2 主要药品与试剂                                        合并相同成分后共得到 8 个组分（Aa3-8-1～Aa3-8-8），
            长叶纽子果药材于2019年8月采自云南省昌宁县，                       然 后 再 利 用 LC-16P 半 制 备 液 相（85％ 甲 醇）纯 化
        由贵州中医药大学中药资源教研室江维克教授鉴定为                            Aa3-8-6 后得到化合物 7（4 mg）；组分 Aa3-8-3 进一步利
        紫金牛属植物长叶纽子果A. virens Kurz var. annamensis          用硅胶柱进行分离，得到化合物 5（8 mg）和化合物 6（4
                                                           mg）；将组分A4进一步用ODS柱进行色谱分离，得到10
        Pitard.的根（标本号 20190813）。地塞米松对照品（批号
                                                           个组分（Aa4-1～Aa4-10），其中 Aa4-7 经 LC-16P 半制备
        D4902，纯度98％）购自美国Sigma公司；C18反相柱填料
                                                           液相（80％甲醇-水）纯化后得到化合物8（7 mg）。
        ODS-A-HG 购自日本 YMC 公司；MTT 溶液及葡聚糖凝
                                                           2.2  长叶纽子果根醇提物乙酸乙酯萃取部位化学成分
        胶LH-20均购自北京索莱宝科技有限公司；柱层析硅胶
                                                           的结构鉴定
        购自青岛海洋化工厂分厂；Gibco 培养基购自赛默飞世
                                                           2.2.1  化合物 1    化合物 1 的分子式为 C30H48O4，为白色
        尔生物化学制品（北京）有限公司；甲醇为色谱纯，其余
                                                           无定形粉末；电喷雾电离质谱（ESI-MS）：m/z 471.3[M－
        试剂均为分析纯，水为屈臣氏饮用水或去离子水。
                                                           H] ；H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ H：9.41（1H，d，J＝1.2
                                                                1
                                                              －
        1.3  细胞
                                                           Hz，H-30），0.76（3H，s，H-25），0.89（3H，s，H-29），0.97
            小鼠单核巨噬细胞白血病细胞 RAW264.7（货号
                                                           （3H，s，H-24），0.98（3H，s，H-23），1.14（3H，s，H-26），1.28
        CL-0190）购自武汉普诺赛生命科技有限公司。
                                                           （3H，s，H-27），0.71（1H，dd，J＝2.6、11.3 Hz，H-5）。
        2 方法与结果                                            13 C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ C：16.0（C-24），16.7（C-25），
        2.1  长叶纽子果根醇提物乙酸乙酯萃取部位化学成分
                                                           18.9（C-27），20.1（C-26），23.3（C-29），28.6（C-23），207.3
        的提取分离
                                                           （C-30），38.0（C-1），28.0（C-2），79.7（C-3），40.3（C-4），
            取干燥的长叶纽子果根 15.0 kg，粉碎，过 20 目筛，
                                                           56.6（C-5），18.2（C-6），33.2（C-7），44.8（C-8），54.0（C-9），
        以70％乙醇加热回流提取2次（150 L/次），每次2 h。回
                                                           43.4（C-10），19.8（C-11），31.0（C-12），88.2（C-13），45.3
        收乙醇，浓缩得浸膏 3.08 kg。将浸膏加去离子水 9 L 分
                                                           （C-14），34.0（C-15），77.8（C-16），49.1（C-17），51.4
        散后，依次用等体积石油醚、乙酸乙酯以及水饱和正丁
                                                           （C-18），24.3（C-19），38.1（C-20），37.0（C-21），32.8
        醇萃取，浓缩，分别得到各萃取物浸膏 155.8、546.4、                     （C-22），78.5（C-28）。以上波谱数据与文献[5]报道的已
        813.7 g。 取 乙 酸 乙 酯 萃 取 物 浸 膏（244 g）进 行 硅 胶         知化合物基本一致，故鉴定化合物 1 为西克拉敏皂苷
       （200～300目）柱色谱分离，以二氯甲烷-甲醇（70 ∶ 1、40 ∶                元A。
        1、15 ∶ 1、5 ∶ 1、1 ∶ 1、0 ∶ 1，V/V）进行梯度洗脱，结合薄层色        2.2.2  化合物 2    化合物 2 的分子式为 C29H48O，为无色
        谱（TLC）检测，合并极性相同的部分后得到 9 个组分                        针状结晶；ESI-MS：m/z 411.3[M－H] ；H-NMR（CDCl3，
                                                                                             1
                                                                                           －
       （A1～A9），并对A1～A4这4个组分进行进一步分离纯                        400 MHz）δH：5.14（1H，d，J＝8.5 Hz，H-22），5.02（1H，dd，
        化。其中，对A1组分进一步用ODS柱进行色谱分离，采                         J＝8.7、15.2 Hz，H-23），0.55（3H，s，H-18），0.79（3H，d，
        用TLC分析，合并相同成分后共得到8个组分（Aa1-1～                       J＝2.0 Hz，H-27），0.80（3H，s，H-19），0.82～0.87（3H，m，
        Aa1-8）。对 Aa1-3 组分进行硅胶柱色谱纯化，并采用石                    H-29），1.03（3H，d，J＝6.7 Hz，H-21），0.95（3H，d，J＝7.4
        油醚-乙酸乙酯（20∶1、10∶1、8∶1、4∶1、2∶1、1∶1、0∶1，V/V）         Hz，H-26），3.2～3.85（1H，m，H-3），5.15～5.17（1H，m，
        进行梯度洗脱，最终析出无色针状结晶，得到化合物 2                          H-7）。 C-NMR（CDCl3，100 MHz）δ C：117.6.3（C-7），
                                                                  13
       （3 mg）。采用 ODS 柱对 A2 组分进行色谱分离，采用                     129.6（C-23），139.7（C-8），138.3（C-22），12.2（C-29），12.4
        TLC 分析，合并相同成分后共得到 10 个组分（Aa2-1～                    （C-18），13.2（C-19），19.1（C-27），21.2（C-26），21.7
        Aa2-10）。组分Aa2-3经LC-16P半制备液相（47％甲醇-                 （C-21），37.3（C-1），31.7（C-2），71.2（C-3），38.2（C-4），
        水）纯化后得到化合物 3（3 mg）；组分 Aa2-7 经 LC-16P               40.4（C-5），29.8（C-6），49.6（C-9），34.4（C-10），21.7


        中国药房    2022年第33卷第17期                                             China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 17  ·2073 ·
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