Page 26 - 《中国药房》2022年17期

表示正常组织，白色表示梗死区。 白酶 9（matrix metalloproteinase，MMP9）、JUN、Akt1、肿
2.5.4 大鼠脑组织中 Akt、p-Akt、Src、p-Src 蛋白表达检 瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）、胱天蛋白酶 3
测 采用 Western blot 法进行检测。将“2.5.3”项下另一 （caspase-3，CASP3）、丝裂原激活蛋白激酶 8（mitogen-
份大鼠脑组织用预冷的1×PBS洗净后剪碎，称取20 mg， activated protein kinase 8，MAPK8）、细胞间黏附分子 1
用含1％蛋白酶抑制剂的4 ℃预冷的RIPA裂解液裂解， （intercellular cell adhesion molecule 1，ICAM1）、血管细
组织裂解液在 12 000×g、4 ℃下离心 10 min，收集上清 胞黏附分子1（vascular cell adhesion molecule 1，VCAM1）、
液，保存待用。其余步骤同“2.4.4”项。 Src（图2B）。
2.6 统计学方法
使用 SPSS 20.0 软件进行统计分析。计量资料以
x±s 表示，多组间比较采用方差分析，组间两两比较采
用LSD-t检验。检验水准α＝0.05。
3 结果
3.1 KAE-靶点-CI/R网络构建结果
通过 SwissTargetPrediction 数据库预测得到 KAE 靶
点，并使用UniProtKB数据库使靶点名称标准化后，共获
得148个KAE 靶点。从GeneCards、NCBI 和Drugbank 3
个数据库中分别筛选出 1 065、73 和 78 个 CI/R 靶点，删
除重复靶点，共收集到 1 124 个 CI/R 靶点。利用 Venny
在线绘图工具，将 148 个 KAE 靶点和 1 124 个 CI/R 靶点
进行比对，最后得到61个共同靶点（图1A）。利用Cyto-
scape 3.7.1软件获得基于KAE-靶点-CI/R之间相互作用
的由63个节点和122条边线组成的复杂网络（图1B）。 A. PPI网络

Src

1 124 61 148
（88.4％） （4.8％） （11.6％）

CI/R靶点 KAE靶点
Akt1
A. Venny图

B.排名前10位核心靶点PPI网络
图2 共同靶点和核心靶点的PPI网络
3.3 分子对接实验结果
为进一步筛选 KAE 治疗 CI/R 的关键靶点，将 KAE
分别与排名前 10 位的核心靶点——PTGS2、MMP9、
B. KAE-靶点-CI/R复杂网络 JUN、Akt1、TNF、CASP3、MAPK8、ICAM1、VCAM1、Src
图1 共同靶点的Venny图和KAE-靶点-CI/R复杂网络
进行分子对接。结果表明，KAE 与上述 10 个核心靶点
3.2 核心靶点网络构建结果 的结合位点依次为 5、4、4、2、3、5、4、5、5、4 个（表 1），主
使用 STRING 数据库构建 61 个共同靶点的 PPI 网 要包括丙氨酸（alanine，ALA）、丝氨酸（serine，SER）、酪
络。以综合得分＞0.4和“Homo sapines”作为选择标准， 氨酸（tyrosine，TYR）、甲硫氨酸（methionine，MET）、赖
获得由 141 个节点和 1 152 条边线组成的 PPI 网络（图 氨酸（lysine，LYS）等。分子对接后的配体-蛋白质相互
2A）。通过CytoHubba插件获得PPI网络中排名前10位 作用分析结果显示，每个小分子与目标蛋白的结合主要
的核心靶点，依次为前列腺素内过氧化物合成酶2（pros- 依赖于氢键。其中，KAE 与核心靶点 Akt、Src 的结合能
taglandin-endoperoxide synthase 2，PTGS2）、基质金属蛋 均不高于－9.0 kcal/mol，说明结合较稳定，提示 KAE 可

·2068 · China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 17 中国药房 2022年第33卷第17期