Page 27 - 《中国药房》2022年17期

能通过作用于 Akt、Src 发挥治疗作用。因此，本研究以
Akt 60 kDa
Akt、Src为靶点进行后续实验验证。
表1 KAE和排名前10位核心靶点的分子对接结果 p-Akt 60 kDa
靶点名称 PDB ID 结合能/（kcal/mol） 结合位点
Sre 55 kDa
PTGS2 5F1A －0.5 SER-530、GLY-526、MET-522、SER-353、HIS-90
MMP9 5UE4 －8.2 ALA-191、HIS-230、GLY-233、TYR-179
JUN 4IZY －7.4 LEU-206、MET-149、LYS-93、ILE-70 p-Sre 55 kDa
Akt1 3CQU －9.1 ALA-230、THR-291
TNF 6OOY －5.6 LYS-11、ALA-156、ASP-10 GAPDH 36 kDa
CASP3 2Y0B －5.9 ASN-74、ARG-76、PHE-55、SER-63、SER-65 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
MAPK8 2GMX －8.4 ALA-36、ASP-169、MET-111、LYS-55 A.电泳图
ICAM1 3TCX －8.0 ALA-242、SER-270、LYS-39、TYR-52、TYR-66
1.5
VCAM1 5VA0 －5.9 ARG-47、TYR-478、HIS-453、TYR-455、ALA-475
Src 2SRC －9.0 ASP-404、LEU-273、MET-341、THR-338
1.0 b
3.4 体外细胞实验验证结果 p-Akt/Akt b
3.4.1 KAE 对 OGD/R 致 HT22 细胞损伤的影响 细胞 0.5 a
活力检测结果显示，与对照组比较，OGD/R 组细胞存活
率显著降低（P＜0.05），提示 OGD/R 导致 HT22 细胞损 0
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
伤；与OGD/R组比较，KAE低、中、高剂量组细胞存活率 B. KAE对HT22细胞中Akt蛋白磷酸化的影响
均显著升高（P＜0.05），提示KAE可明显促进HT22细胞 1.5
存活，并呈剂量依赖趋势。结果见图3。
1.0
p-Src/Src
1.5 b
0.5 a
细胞存活率/％ a b b 0 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
b
1.0
0.5
C. KAE对HT22细胞中Src蛋白磷酸化的影响
Ⅰ：对照组；Ⅱ：OGD/R组；Ⅲ：KAE低剂量组；Ⅳ：KAE中剂量组；
0
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅴ：KAE 高剂量组；a：与对照组比较，P＜0.05；b：与 OGD/R 组比较，
Ⅰ：对照组；Ⅱ：OGD/R组；Ⅲ：KAE低剂量组；Ⅳ：KAE中剂量组； P＜0.05
Ⅴ：KAE 高剂量组；a：与对照组比较，P＜0.05；b：与 OGD/R 组比较， 图4 KAE对HT22细胞中Akt、Src蛋白磷酸化的影响
P＜0.05
图3 KAE对HT22细胞存活率的影响 15
3.4.2 KAE对OGD/R损伤HT22细胞中Akt、Src蛋白磷 a
酸化的影响 Western blot法检测结果显示，与对照组比 10
较，OGD/R 组细胞中 Akt、Src 蛋白的磷酸化水平均显著 神经功能评分/分 b
降低（P＜0.05）；与OGD/R组比较，KAE中、高剂量组细 5
胞中Akt蛋白的磷酸化水平和KAE高剂量组细胞中Src
0
蛋白的磷酸化水平均显著升高（P＜0.05），且呈剂量依 Sham组 MCAO组 KAE组
赖趋势。结果见图4。 a：与Sham组比较，P＜0.05；b：与MCAO组比较，P＜0.05
3.5 大鼠体内实验验证结果 图5 各组大鼠的神经功能评分
3.5.1 KAE对MCAO模型大鼠神经功能的影响 神经 KAE 组大鼠脑梗死体积显著降低（P＜0.05）。结果见
功能评分结果显示，与Sham组比较，MCAO组大鼠神经 图6。
功能评分显著升高（P＜0.05）；与MCAO组比较，KAE组 3.5.3 KAE 对 MCAO 模型大鼠脑组织中 Akt、Src 蛋白
大鼠神经功能评分显著降低（P＜0.05），提示 KAE 能够 磷酸化的影响 Western blot 法检测结果显示，与 Sham
减轻MCAO造成的脑损伤。结果见图5。 组比较，MCAO 组大鼠脑组织中 Akt、Src 蛋白磷酸化水
3.5.2 KAE 对 MCAO 模型大鼠脑组织病理学的影 平均显著降低（P＜0.05）；与MCAO组比较，KAE组大鼠
响 TTC 染色结果显示，与 Sham 组比较，MCAO 组大 脑组织中 Akt、Src 蛋白磷酸化水平均显著升高（P＜
鼠脑梗死体积显著增加（P＜0.05）；与 MCAO 组比较， 0.05）。结果见图7。

中国药房 2022年第33卷第17期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 17 ·2069 ·