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2 方法与结果                                             将所得的 10 批标准汤剂的 HPLC 色谱图以“AIA”格式
        2.1 HPLC特征图谱的建立                                     文件导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004
        2.1.1  标准汤剂的制备         取健脾益肺鼻炎方全方饮片                 版）》进行分析，以 S7 样品的 HPLC 色谱图为参照图谱
        （黄芪、麸炒白术、防风、桂枝、干姜、桔梗、辛夷、白芷各                        （该批样品色谱峰分离度较好），6号峰为参照峰，采用中
        适量），以 10 倍量水（mL/g）浸泡 30 min，先武火煮沸后                  位数法生成 10 批样品的叠加特征图谱和对照特征图谱
        文火煎煮60 min，滤过；药渣加入8倍量水（mL/g），先武                    （R）。结果，10批健脾益肺鼻炎方标准汤剂共标定出24
        火煮沸后文火煎煮 40 min，过滤；合并 2 次滤液，小火浓                     个共有特征峰（图1）。经与“2.1.3”项下混合对照品的色
        缩至300 mL，即得标准汤剂，冷冻备用 。                              谱图比对，共指认了 8 个特征峰，分别是升麻素苷（2 号
                                         [6]
        2.1.2  供试品溶液的制备          吸取“2.1.1”项下标准汤剂            峰）、毛蕊异黄酮葡萄糖苷（4 号峰）、升麻素（5 号峰）、
        适量，以4 000 r/min离心20 min，精密量取上清液2 mL，                5-O-甲基维斯阿米醇苷（6号峰）、亥茅酚苷（12号峰）、毛
        加甲醇定容至 10 mL，摇匀，以 4 000 r/min 离心 10 min，            蕊异黄酮（15 号峰）、芒柄花素（19 号峰）和木兰脂素（21
        经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。                             号峰）。结果见图2。
        2.1.3  混合对照品溶液的制备            取升麻素苷、毛蕊异黄
        酮葡萄糖苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚
                                                              194.43                                      R
        苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素和木兰脂素对照品各适量，置                                                                         S10
        于同一量瓶中，加甲醇溶解并定容至10 mL，制成上述各                           144.38                                      S9
                                                                                                          S8
        对照品质量浓度分别为21.3、15.6、16.0、19.5、20.3、15.5、                                                          S7
        13.9、17.0 μg/mL的混合对照品溶液。                             U/mV  94.33                                  S6
                                                                                                          S5
        2.1.4  色谱条件      色谱柱为 YMC Hydrosphere C18 （4.6        44.28                                       S4
                                                                                                          S3
        mm×250 mm，5 μm）；以乙腈（A）-0.05％磷酸溶液（B）为                                                              S2
        流动相进行梯度洗脱（0～10 min，15％A；10～28 min，                    －5.77                                       S1
                                                                  0   10.15  20.29  30.44  40.58  50.73  60.87  71.02
        15％A→23％A；28～36 min，23％A→31％A；36～41 min，                                     t/min
        31％A→32％A；41～46 min，32％A→40％A；46～52 min，            图 1 10 批健脾益肺鼻炎方标准汤剂的 HPLC 叠加特
        40％A→47％A；52～62 min，47％A→60％A；62～70 min，                 征图谱与对照特征图谱（R）
        60％A→75％A）；流速为 1 mL/min；柱温为 30 ℃；检测                         80
        波长为230 nm；进样量为10 μL。                                        70
                                                                    60
        2.1.5  精密度试验       取“2.1.2”项下供试品溶液（编号
                                                                    50
        S1），按“2.1.4”项下色谱条件连续进样 6 次，以 6 号峰为                          mAU  40
        参照峰（该峰分离度较好），计算各共有峰的相对保留时                                   30
        间和相对峰面积。结果显示，各共有峰相对峰面积的                                     20
        RSD均小于4.00％（n＝6），相对保留时间的RSD均小于                              10
        1.00％（n＝6），表明仪器精密度良好。                                        0
        2.1.6  稳定性试验       取“2.1.2”项下供试品溶液（编号                          0   10  20  30  40  50  60  70
                                                                                    t/min
        S1），分别于室温下放置0、2、4、8、12、24 h时按“2.1.4”项                                   A.混合对照品溶液
        下色谱条件进样测定，以6号峰为参照峰，计算各共有峰                                   40
        的相对保留时间和相对峰面积。结果显示，各共有峰相
        对峰面积的RSD均小于4.00％（n＝6），相对保留时间的                               30
        RSD均小于1.00％（n＝6），表明供试品溶液在室温下放                               mAU  20
        置24 h内稳定。
        2.1.7  重复性试验      取“2.1.1”项下标准汤剂（编号S1），                     10
        按“2.1.2”项下方法平行制备6份供试品溶液，再按“2.1.4”
        项下色谱条件进样测定，以6号峰为参照峰，计算各共有                                    0
        峰的相对保留时间和相对峰面积。结果显示，各共有峰相                                      0   10  20  30  40  50  60  70
                                                                                    t/min
        对峰面积的RSD均小于4.00％（n＝6），相对保留时间的                                    B.健脾益肺鼻炎方标准汤剂供试品溶液
        RSD均小于1.00％（n＝6），表明方法重复性良好。                            2：升麻素苷；4：毛蕊异黄酮葡萄糖苷；5：升麻素；6：5-O-甲基维斯
        2.1.8  特征图谱的建立及共有峰的指认                 分别精密吸         阿米醇苷；12：亥茅酚苷；15：毛蕊异黄酮；19：芒柄花素；21：木兰脂素
        取10批次健脾益肺鼻炎方标准汤剂，按“2.1.2”项下方法                       图2   混合对照品溶液和健脾益肺鼻炎方标准汤剂供试
        制备供试品溶液，再按“2.1.4”项下色谱条件进样测定。                             品溶液的HPLC图


        ·1982 ·  China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 16                                 中国药房    2022年第33卷第16期
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