Page 62 - 《中国药房》2022年16期
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验开始计时间）；7 d 后，于尾根部背面皮下再次注射混                         RANK、OPG）水平。具体操作严格按说明书步骤进行。
        合乳剂 200 μL，加强免疫（第 7 天）。空白组大鼠在相同                     2.6 踝关节病理学观察
        时间点，于同部位注射等体积生理盐水。各组大鼠于                                 采用 HE 染色法进行检测。处死大鼠后，取后足踝
        加强免疫当天（第 7 天）开始灌胃给药（给药体积为 10                        关节，用 4％多聚甲醛固定，脱钙，常规石蜡包埋，切片，
        mL/kg）。阳性对照组给予吲哚美辛水溶液（剂量为                           经 HE 染色后，于显微镜下观察后足踝关节滑膜的形态
        0.013 5 g/kg），青风藤配伍制附子组给予青风藤配伍制                     结构、滑膜增生、炎性浸润等情况。
        附子水提液（青风藤剂量为 1.08 g/kg，制附子剂量为                       2.7 踝关节滑膜组织中趋化因子表达情况检测
        1.35 g/kg），每天给药1次，第30天给药结束；空白组和模                        采用免疫组织化学法进行检测。取“2.6”项下已制
        型组则在相同时间给予等体积蒸馏水。                                   好的踝关节切片，依次放入二甲苯和无水乙醇中进行脱
        2.3 RA模型评价相关指标检测                                    蜡；用一抗（RANKL、RANK、OPG）、二抗稀释液孵育后
        2.3.1  一般情况观察与体质量测量              每天观察大鼠的            显色；切片置入苏木素染液中3～5 min，用自来水洗，分
        一般情况变化，包括精神状态、皮毛色泽和活动状态                             化液分化，再用自来水洗，返蓝液返蓝，流水冲洗，脱水，
        等。于关节开始出现炎症肿胀后每3天用电子天平称定                            中性树胶封片。显微镜下拍片，观察 RANKL、RANK、
        体质量，记录各组大鼠体质量变化情况，至第30天。
                                                            OPG的表达情况（以光密度值衡量）。
        2.3.2  足肿胀度测量        在大鼠右后足踝关节部位用苦
                                                            2.8 统计学分析
        味酸进行永久性标记。于关节开始出现炎症肿胀后每3
                                                                采用 SPSS 21.0 软件进行数据统计分析，实验结果
        天使用游标卡尺在标记部位测量其足跖肿胀厚度，每只
                                                            以 x±s 表示，组间差异比较采用单因素方差分析，方差
        重复测量3次，取平均值，至第30天。
                                                            齐时采用 LSD-t 检验，方差不齐时采用 Dunnett’s T3 检
        2.3.3 AI 评分    由 3 名以上研究者于第 12 天开始每 3
                                                            验。检验水准α＝0.05。
        天根据关节肿胀度、关节颜色及关节活动情况评价大鼠
                                                            3 结果
        全身关节病变程度。采用4分制对足爪炎症进行评分，
                                                            3.1  各组大鼠一般情况和体质量变化
        AI评分标准：0分，无红肿；1分，踝关节或跗骨关节出现
                                                                除空白组外，各组大鼠均于第 9～12 天关节出现炎
        红斑或轻微肿胀；2分，踝关节到跗骨关节出现红斑和轻
                                                            症肿胀。第 12～30 天，与空白组比较，模型组大鼠精神
        微肿胀；3分，踝关节到跖骨关节出现红斑和中度肿胀；4
                                                            状态虚弱，活动力下降明显，毛发失去光泽，体质量显著
                                        [9]
        分，踝关节到趾骨关节全部足爪肿胀 。累计四肢关节
                                                            降低（P＜0.05 或 P＜0.01）；与模型组比较，阳性对照组
        的得分为每只大鼠的AI评分，最高为16分。
                                                            和青风藤配伍制附子组大鼠一般情况均有所改善，体质
        2.4  踝关节骨质检测
                                                            量显著升高（P＜0.05或P＜0.01）。体质量结果见表1。
            采用小动物 CT 机进行检测。第 30 天，每组随机挑
                                                            3.2  青风藤配伍制附子对 RA 模型大鼠足肿胀度的
        选3只大鼠，将大鼠处死后取右后足踝关节，将标本平行
        固定于小动物 CT 机的样本杯中。设置扫描角度为                            影响
        360°，分辨率为 10 μm，电压为80 kV，电流为500 μA，扫                    第 12～30 天，与空白组相比，模型组大鼠足肿胀度
        描时间为4 min。通过专用CT分析软件对所得图像进行                         显著增加（P＜0.01）；与模型组比较，阳性对照组和青风
        三维图片重建，分析骨侵蚀程度、滑膜增生情况和组织                            藤配伍制附子组大鼠足肿胀度显著降低（P＜0.01）。结
        破坏情况。                                               果见表2。
        2.5 血清中炎症因子及趋化因子水平检测                                3.3 青风藤配伍制附子对RA模型大鼠AI评分的影响
            采用ELISA法进行检测。第30天，将大鼠麻醉后，                           第 12～30 天，与空白组比较，模型组大鼠 AI 评分
        取腹主动脉血，经抗凝处理后，以 4 000 r/min 离心 10                   显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，阳性对照组和青
        min，分离血清，使用相应ELISA试剂盒测定大鼠血清中                        风藤配伍制附子组大鼠 AI 评分显著降低（P＜0.01）。
        炎 症 因 子（IL-31、IL-25、IL-3）和 趋 化 因 子（RANKL、           结果见表 3。

                                     表1   各组大鼠体质量的测定结果（x±±s，n＝10，g）
        组别             第9天        第12天       第15天       第18天       第21天       第24天       第27天       第30天
        空白组           61.47±6.50  87.34±1.97  109.39±6.28  132.28±6.73  156.25±8.38  177.51±7.24  199.70±6.47  221.48±7.09
        模型组           54.73±1.85  59.74±3.40 a  51.55±3.88 a  52.91±3.02 b  54.95±3.04 b  60.17±2.80 b  70.58±3.04 b  86.63±3.46 b
        阳性对照组         58.63±2.75  80.98±3.48 c  96.49±3.06 c  115.50±4.17 d  139.27±7.05 d  159.39±7.66 d  183.27±7.74 d  208.71±8.61 d
        青风藤配伍制附子组     57.33±1.74  74.41±1.24 c  90.35±4.31 c  105.03±5.09 d  121.19±3.49 d  139.98±4.40 d  161.21±2.62 d  183.31±2.81 d
            a：与空白组比较，P＜0.05；b：与空白组比较，P＜0.01；c：与模型组比较，P＜0.05；d：与模型组比较，P＜0.01


        ·1976 ·  China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 16                                 中国药房    2022年第33卷第16期
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