Page 58 - 《中国药房》2022年16期

2.5 4种差异性成分的含量测定 2.5.8 稳定性试验 取“2.5.3”项下同一供试品溶液（编
采用 HPLC 法对“2.4”项下所得 4 种差异性成分（阿 号S1），分别于室温下放置0、2、4、8、12、24 h时按“2.5.1”
魏酸、洋川芎内酯A、E-藁本内酯、Z-藁本内酯）的含量进 项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果显示，阿魏
行测定。 酸、洋川芎内酯 A、E-藁本内酯、Z-藁本内酯峰面积的
2.5.1 色谱条件 同“2.1.1”项。 RSD 分别为 0.18％、0.17％、0.50％、0.25（n＝6），表明该
2.5.2 混合对照品溶液的制备 取阿魏酸、洋川芎内酯 供试品溶液在室温下放置24 h内稳定性良好。
A、E-藁本内酯、Z-藁本内酯 4 种对照品各适量，按 2.5.9 加样回收率试验 取已知含量的样品（编号S4）6
“2.1.2”项下方法制备各单一对照品贮备液。取上述各 份，每份约 0.25 g，置具塞锥形瓶中，加入与已知量相当
单一对照品贮备液适量，按“2.1.2”项下方法制成上述成 的阿魏酸、洋川芎内酯 A、E-藁本内酯、Z-藁本内酯对照
分质量浓度分别为 1.84、1.96、1.68、2.98 mg/mL 的混合 品溶液（按“2.5.2”项下方法配制），按“2.5.3”项下方法制
对照品溶液。 备供试品溶液，再按“2.5.1”项下色谱条件进样测定，记
2.5.3 供试品溶液的制备 同“2.1.3”项。 录峰面积并计算加样回收率。结果显示，阿魏酸、洋川
2.5.4 专属性试验 取“2.5.2”项下混合对照品溶液、
芎内酯A、E-藁本内酯、Z-藁本内酯的平均加样回收率分
“2.5.3”项下供试品溶液和空白对照溶液（70％甲醇），按
别为 99.92％、98.01％、100.90％、99.73％，RSD 分别为
“2.5.1”项下色谱条件下进样测定，记录色谱图（图略）。
0.69％、0.26％、1.45％、0.17％（n＝6）。
结果显示，阿魏酸、洋川芎内酯A、E-藁本内酯、Z-藁本内
2.5.10 含量测定 分别取 12 批茶芎样品，按“2.5.3”项
酯色谱峰的分离度均大于1.5，且各色谱峰无拖尾现象，
下方法制备供试品溶液，再按“2.5.1”项下色谱条件进样
提示方法专属性良好。
测定，记录峰面积并按外标法计算含量。采用 Graph-
2.5.5 线性范围考察 取“2.5.2”项下阿魏酸、洋川芎内
Pad Prism 9.3.0 软件对数据进行统计分析，组间比较采
酯A、E-藁本内酯、Z-藁本内酯混合对照品溶液0.1、0.5、
用单因素方差分析，检验水准α＝0.05，结果见表 5。由
1、2、5 mL，分别置于10 mL量瓶中，加70％甲醇定容，再
表5可知，12批茶芎药材中，阿魏酸含量均在0.4 mg/g以
按“2.5.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以待测
上，3 个产地茶芎中该成分含量两两比较差异均有统计
成分的质量浓度为横坐标（X）、峰面积为纵坐标（Y）进行
学意义，且以瑞昌茶芎最高（P＜0.05 或 P＜0.01），故可
线性回归，结果见表 4。分别取阿魏酸、洋川芎内酯 A、
作为标志性成分；洋川芎内酯 A 含量均高于或接近于
E-藁本内酯、Z-藁本内酯混合对照品溶液（质量浓度分
1.2 mg/g，3个产地茶芎中该成分含量两两比较差异均有
别为 0.018、0.020、0.017、0.030 mg/mL，按“2.5.2”项下方
统计学意义，且以瑞昌茶芎最高（P＜0.05 或 P＜0.01），
法配制）适量，以70％甲醇倍比稀释，按“2.5.1”项下色谱
故也可作为标志性成分；E-藁本内酯含量均在 0.1 mg/g
条件进样测定，分别以信噪比 3 ∶ 1、10 ∶ 1 计算检测限和
以上，两两比较差异显著且德安茶芎显著高于其他产地
定量限，结果见表4。
茶芎（P＜0.01），故也可作为标志性成分；瑞昌、武宁、德
表4 4种成分的线性关系考察结果
安茶芎中Z-藁本内酯的含量分别高于8.0、7.0、4.0 mg/g，
线性范围/ 检测限/ 定量限/
待测成分 回归方程 相关系数
（mg/mL） （μg/mL） （μg/mL） 两两比较差异均有统计学意义（P＜0.01），故也可作为
阿魏酸 Y＝5 843.1X+3 241.5 0.999 8 0.018～0.920 0.061 0.224 标志性成分。上述含量测定结果也佐证了OPLS-DA模
洋川芎内酯A Y＝7 683.4X+2 227.2 0.999 7 0.020～0.980 0.151 0.526
E-藁本内酯 Y＝7 832.5X+1 376.4 0.999 8 0.017～0.840 0.072 0.232 型的预测结果，阿魏酸、洋川芎内酯A、E-藁本内酯、Z-藁
Z-藁本内酯 Y＝8 623.5X+2 346.6 0.999 9 0.030～1.490 0.107 0.412 本内酯均可作为影响质量的差异性成分。
2.5.6 精密度试验 取“2.5.3”项下供试品溶液（编号 表5 12批茶芎样品中4种成分的含量测定结果（mg/g）
S1），按“2.5.1”项下色谱条件连续进样 6 次，记录峰面 编号 阿魏酸 洋川芎内酯A E-藁本内酯 Z-藁本内酯
积。结果显示，阿魏酸、洋川芎内酯A、E-藁本内酯、Z-藁 S1 0.533 1.266 0.123 7.681
S2 0.512 1.231 0.125 7.610
本内酯峰面积的 RSD 分别为 0.12％、0.54％、0.98％、
S3 0.526 1.295 0.118 7.569
0.42％（n＝6），表明方法精密度良好。 S4 0.489 1.251 0.122 7.319
2.5.7 重复性试验 取同一批茶芎样品（编号S1）6份， S5 0.488 1.184 0.118 7.200
S6 0.649 1.588 0.134 8.596
按“2.5.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.5.1”项下色
S7 0.658 1.450 0.130 8.076
谱条件进样测定，记录峰面积并按外标法计算含量。结 S8 0.603 1.462 0.135 8.643
S9 0.428 1.377 0.223 4.996
果显示，阿魏酸、洋川芎内酯A、E-藁本内酯、Z-藁本内酯
S10 0.433 1.345 0.227 4.940
含量的 RSD 分别为 0.93％、1.38％、1.45％、1.12％（n＝ S11 0.415 1.375 0.229 4.769
6），表明方法重复性良好。 S12 0.422 1.307 0.227 4.508

·1972 · China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 16 中国药房 2022年第33卷第16期