Page 68 - 《中国药房》2022年14期

定性离子对分别为 m/z 356.1→356.1、m/z 338.1→338.1； 2.7 CATM中4种立体异构体相对纯度的测定
去簇电压分别为 70、175 V；扫描时间均为 100 ms；碰撞 取 500 ng/mL 目标产物，按“2.3”项下方法进样分
能量均为5 eV。 析，按归一化法计算其相对纯度。
表1 CATM和（S）-2-氧氯吡格雷定性定量分析的梯度 2.8 顺式CATM保留时间的确定
洗脱程序 受试者口服氯吡格雷后1 h，采集前臂静脉血2 mL，

时间/min 流动相A/％ 流动相B/％ 时间/min 流动相A/％ 流动相B/％ 置于肝素抗凝管中，即刻以 4 000×g 离心 10 min，取上
0 83 17 23 70 30 层血浆 50 μL，加入乙腈 250 μL，涡旋振荡 5 min，再以
8 83 17 28 0 100
9 80 20 30 0 100 12 000×g离心5 min，取上清液吹干后，以“2.3”项下初始
18 80 20 32 83 17 比例的流动相复溶，取 10 μL，按“2.3”项下方法进样
19 70 30 34 83 17
分析。
2.4 CATM分离纯化的色谱条件
3 结果
以ChromCore 120 C18制备柱（10 mm×50 mm，5 μm）
3.1 CATM的制备情况
为色谱柱，以水为流动相A、乙腈为流动相B进行梯度洗
80 μmol/L的（S）-2-氧氯吡格雷经过2次离体大鼠肝
脱（洗脱程序见表 2）；流速为 1 mL/min；进样量为 100
脏灌流生物转化，得灌流液 580 mL，经分离纯化得目标
mL。
产物 2 mg，即 48 μmol 的（S）-2-氧氯吡格雷生物转化得
表2 CATM分离纯化的梯度洗脱程序
5.62 μmol 的目标产物，转化率为 11.71％。分离纯化后
时间/min 流动相A/％ 流动相B/％ 时间/min 流动相A/％ 流动相B/％
0 97 3 75.00 55 45 的洗脱液中目标组分的色谱图（图2A）显示，有4个峰分
45.00 97 3 75.01 0 100 别在 21.5、22.6、26.7、27.9 min 时被洗脱，其相应质谱图
45.01 55 45 85.00 0 100
较为相似（图2B），显示主要碎片离子为m/z 155.2、182.8、
2.5 CATM的制备 212.1、296.1，与研究报道类似 [11－12] ，可确认这 4 个峰为
取 80 μmol/L 的（S）-2-氧氯吡格雷灌流液 300 mL， CATM的4个立体异构体。
按“2.2”项下方法以约 3.3 mL/min 的流速进行 90 min 的
5.0×10 5
非循环灌流，制备CATM。收集灌流液，经0.22 μm水系
滤膜滤过，按“2.4”项下方法进行分离纯化，每间隔1 min 4.0×10 5
富集纯化后的洗脱物；再按“2.3”项下方法进样，验证洗
脱物组分，确定目标组分的时间收集范围；富集目标组 intensity/cps 3.0×10 5
分，冷冻干燥后，称定质量，以最终获得CATM的物质的 2.0×10 5
量与灌流液中（S）-2-氧氯吡格雷的物质的量之比计算转

化率。 1.0×10 5
2.6 CATM的鉴定
0
2.6.1 质谱鉴定 取“2.5”项下制备的目标产物，用 15 20 25 30
50％甲醇溶解稀释成500 ng/mL，在正离子模式下，针泵 t/min
A.色谱图
进样，流速为 7 μL/min；在母离子全扫描模式下的扫描
范围为 350～360 Da，扫描速度为 10 Da/s，扫描时间为 5 8.0×10 6
min，分别确定目标产物母离子质荷比，并得最佳去簇电
压值；在子离子扫描模式下的初始碰撞能为 10 eV，以 6.0×10 6
5～10 eV为步长调节，扫描速度为200 Da/s，扫描时间为
5 min，获得子离子信息。 intensity/cps 4.0×10 6
2.6.2 NMR谱鉴定 以氘代二甲基亚砜[核磁共振氢谱
2.0×10 6
1
（H-NMR）为 2.50 ppm]为溶剂分别测定目标产物的
H-NMR谱和重水交换谱。将各氢信号分类编号汇总并 0
1
依据NMR命名法（化学位移、氢分布、峰分裂数）对分子 0 50 100 150 200 250 300 350 400
m/z
的单个质子氢信号进行共振分配，通过重水交换谱验证 B.质谱图
活泼氢信号。 图2 分离纯化后目标组分的色谱图和质谱图

·1726 · China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 14 中国药房 2022年第33卷第14期