Page 67 - 《中国药房》2022年14期
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1 材料                                               LW-20220309001-01。
        1.1 主要仪器                                           2 方法

            本研究所用主要仪器包括肝脏器官灌流仪（徐州医                         2.1 溶液的配制
        科大学附属连云港医院临床药理实验室设计）、AKTA                          2.1.1 Krebs-Henseleit 碳 酸 氢 盐 缓 冲 液     按 Krebs-
        pure 型 蛋 白 纯 化 仪（美 国 General Electric 公 司）、        Henseleit 碳酸氢盐缓冲液（K-H 液）的经典配方（118
        DUC-23050-J00型真空冷冻干燥仪（英国GeneVac miVac              mmol/L 氯化钠，4.7 mmol/L 氯化钾，1.2 mmol/L 七水合
        公司）、Bruker avance Ⅲ HD 500 型核磁共振（nuclear           硫酸镁，1.2 mmol/L 磷酸二氢钾，2.5 mmol/L 氯化钙，25
                                                                          [8]
        magnetic resonance，NMR）仪（德国 Bruker 公司）、Waters      mmol/L碳酸氢钠 ），再以终浓度为10 mmol/L的葡萄糖
        Acquity UPLC Ⅰ Class型超高效液相色谱仪（美国Waters             作为能量来源进行配制，具体操作如下：取氯化钠6.89 g、
        公司）、AB Qtrap 4500 型质谱仪（美国 AB Sciex 公司）、            氯化钾0.35 g、七水合硫酸镁 0.30 g、磷酸二氢钾0.16 g、
        T1型氮气发生器（瑞士Gravimetrics公司）等。                       碳酸氢钠 2.10 g、一水合葡萄糖1.98 g、氯化钙0.27 g，用
        1.2 主要药品与试剂                                        双蒸水溶解，并定容至 1 000 mL，再用盐酸调 pH 至
           （S）-2-氧氯吡格雷（批号 20200105，纯度 99.0％）由              7.35～7.45，经0.22 μm滤膜滤过，现配现用。
                                                     [7]
        徐州医科大学附属连云港医院临床药理实验室自制 ；                           2.1.2 （S）-2-氧氯吡格雷灌流液          将（S）-2-氧氯吡格雷
        氯化钠（批号 20220417，纯度 99.0％）、氯化钾（批号                   0.008 g 充分溶解于 3 mL 乙腈中，再加入至 297 mL K-H
        20160118，纯度99.5％）、七水合硫酸镁（批号20190625，               液中，混匀即得。
        纯 度 99.0％）、磷 酸 二 氢 钾（批 号 20190612，纯 度              2.2  灌流方法
                                                                                        [10]
                                                                           [9]
        99.5％）、氯化钙（批号20181012，纯度96.0％）、碳酸氢钠                    根据 Wang 等 和 Ferrigno 等 报道的方法加以改
       （批号 20160219，纯度 99.5％）、一水合葡萄糖（批号                    进，具体操作如下：SD大鼠术前禁食12 h，不禁水，用七
        K1925024，纯度 98.0％）均购自国药集团化学试剂有限                    氟烷维持吸入麻醉，沿腹直线打开腹腔，将内脏轻轻横
        公司；乙酸铵（批号 E057G140，纯度 98.0％）购自德国                   置，暴露门静脉、下腔静脉（腹腔段），迅速于门静脉注入

        CNW 公司；盐酸（批号 160112012H）购自南京化学试                    100 单位肝素抗凝并插管固定，用提前预热至 37 ℃的
        剂股份有限公司；肝素钠注射液（批号 52108110，规格                      K-H 液以 10 mL/min 的流速冲洗肝脏残血；剪开下腔静
        每 2 mL 12 500 单位）购自江苏万邦生化医药集团有限                    脉（腹腔段），沿腹腔中线往上剪开胸腔，分出下腔静脉
        责任公司；吸入用七氟烷（批号18120331，规格120 mL）                   （胸腔段）并插管作为灌流液的流出管，同时结扎下腔静
        购自上海恒瑞医药有限公司；硫酸氢氯吡格雷片（批号                           脉（腹腔段），形成灌流通路；迅速将完整的肝脏分离出
        AA976，规格 75 mg）购自赛诺菲（杭州）制药有限公司；                    来，转移至 37 ℃的灌流室中，待肝脏残血冲洗干净后，
        氘代二甲基亚砜（批号296147，同位素纯度99.9％）购自                     换 80 μmol/L 的（S）-2-氧氯吡格雷灌流液。灌流方式为
        美国 Sigma 公司；乙腈、甲醇（均为色谱纯）均购自德国                      非循环灌流。
        Merck公司，其余试剂均为分析纯或实验室常用规格，水                        2.3  CATM 和（S）-2-氧氯吡格雷定性定量分析的色谱
        为纯净水。                                              与质谱条件
        1.3  动物                                                采用超高效液相色谱-串联质谱（ultra performance
            SPF 级雄性 Sprague Dawley（SD）大鼠 2 只，体质量           liquid chromatography tandem mass，UPLC-MS/MS）法进
        200～250 g，由南通大学实验动物中心提供，实验动物生                      行测定。色谱条件如下：以 Waters Acquity UPLC BEH
        产许可证号为 SCXK（苏）2019-0001，使用许可证号为                    C18 （2.1 mm×150 mm，1.7 μm）为色谱柱，以10 mmol/L乙
        SYXK（苏）2018-0026。大鼠在自然昼夜照明、相对湿度                    酸铵溶液为流动相A、乙腈为流动相B进行梯度洗脱（洗

        40％～70％、温度 12～26 ℃的环境下饲养，自由饮水、                     脱程序见表1）；流速为0.25 mL/min；柱温为40 ℃；进样
        进食（普通维持饲料）。                                        室温度为 4 ℃；进样量为 2 μL。质谱条件如下：采用电
        1.4 受试者                                            喷雾离子源；采用多反应监测模式扫描母离子，增强
            招募1名长期服用氯吡格雷的男性稳定期冠脉综合                         子离子模式扫描碎片离子，正离子方式检出；气帘气
        征受试者（75 mg 维持剂量），受试者试验前被告知试验                       （N2）压力为 10 psi；碰撞气模式为 High；离子化电压为
        方案与目的，并签署知情同意书。试验方案经徐州医科                           5 500 V；温度为 200 ℃；喷雾气（N2 ）压力为 30 psi；辅助
        大 学 附 属 连 云 港 医 院 伦 理 委 员 会 批 准 ，批 件 号 为           加热气（N2 ）压力为 30 psi；CATM、（S）-2-氧氯吡格雷的


        中国药房2022年第33卷第14期                                                China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 14  ·1725 ·
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