Page 73 - 《中国药房》2022年14期

and Beclin1 were decreased significantly in the inhibitor group （P＜0.05）. CONCLUSIONS Modified Yijing decoction can
improve ovarian function，regulate the secretion of sex hormone，and protect ovarian tissue in DOR model rats，and the
mechanism of which may be related to the inhibition of HIF-1α/ Bnip3/Beclin1 pathway.
KEYWORDS modified Yijing decoction；ovarian function；hypoxia inducible factor 1α；autophagy；rat

卵 巢 储 备 功 能 下 降（decrease of ovarian reserve， 99％）购自北京华迈科生物技术有限责任公司；苏木精-
DOR）是指女性卵巢产生的卵母细胞数量及其质量下 伊红染液（批号 G1120）和 TRIzol 试剂（批号 15596-026）
降，主要表现为月经不调、继发性闭经、不孕等症状 。 均购自北京索莱宝科技有限公司；促卵泡素（follicle
[1]
DOR是卵巢功能退化至某种程度的一种疾病，若不加以 stimulating hormone，FSH）、促黄体生成激素（luteinizing
干预，卵巢功能可能继续退化而造成卵巢功能不全或卵 hormone，LH）酶联免疫吸附试验（enzyme linked immu-
巢早衰，因此必须尽早采取有效方法对其进行干预治 nosorbent assay，ELISA）试剂盒（批号分别为 ER0960、
疗。但目前现代医学对 DOR 的发病机制尚未明确，因 ER1123）均购自武汉恩菲生物科技有限公司；抗苗勒氏
此临床暂时缺乏安全有效的 DOR 治疗方法，西医主要 管 激 素（anti-Müllerian hormone，AMH）ELISA 试 剂 盒
依靠激素补充治疗，但长期激素治疗会增加患者的患癌 （批号E-EL-M3015）购自武汉伊莱瑞特生物科技有限公
风险 [2－3] 。已有报道提出，肾气盛衰与心、肝、脾之气有 司；雌激素（estrogen，E2 ）ELISA 试剂盒（批号 20201214）
[4]
关，由此创制的益经汤使心、肝、脾、肾四经同治 。加减 购自上海研启生物科技有限公司；鼠源 HIF-1α、Bnip3、
益经汤是在益经汤的基础上去白术、山药，加菟丝子（增 Beclin1 单克隆抗体（批号分别为 ab179483、ab109362、
强了补肾的作用），去生枣仁、牡丹皮，加丹参（“一味丹 ab254511）均购自英国 Abcam 公司；BCA 蛋白浓度检测
参，功同四物”，减少了方剂药物的组成），易人参为党参 试剂盒（批号 S0131S）购自上海碧云天生物技术有限公
而组成。有研究认为，加减益经汤对 DOR 患者卵巢功 司；逆转录试剂盒（批号4374966）购自美国Thermo Fisher
能的改善效果十分明显，且在改善卵巢储备功能、提高 Scientific 公司；戊酸雌二醇片（批号 201710BJ125，规格
女性受孕率方面具有一定功效 [5－6] ，但其作用机制尚不 1 mg/片）购自拜尔医药保健有限公司广州分公司；HIF-1α
清楚。有研究指出，长时间缺氧会诱发多种细胞死亡， 转录抑制剂 YC-1（批号 Y1027）购自美国 Sigma-Aldrich
是导致卵泡闭锁、卵母细胞数量减少、卵巢功能衰退的 公司；辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）标
重要原因之一 [7－9] 。低氧诱导因子 1α（hypoxia inducible 记的山羊抗兔免疫球蛋白 G 二抗和鼠源β-肌动蛋白
factor-1α，HIF-1α）、B 淋巴细胞瘤 2 基因/腺病毒 E1B 相 （β-actin）抗体（批号分别为20181225、16AF0207）均购自
互作用蛋白3重组蛋白（B lymphocytoma 2 gene/adenovi- 北京中杉金桥生物技术有限公司；其他试剂均为分析纯
rus E1B interacting protein 3 recombinant protein，Bnip3）、 或实验室常用规格，水为纯净水。
自噬关键分子酵母Atg6同系物（Beclin1）通路参与调节 1.3 实验动物
细胞缺氧自噬，通过调节上述通路可逆转小鼠卵巢内的 SPF 级 SD 成年雌性大鼠 140 只，7～8 周龄，体质量
缺氧及自噬状态，从而发挥提高 DOR 模型小鼠生育力 （200±20）g，购自浙江省医学科学院，实验动物生产许
的作用 [10－11] 。基于此，本研究探讨了加减益经汤对DOR 可证号为 SCXK（浙）2019-0002。所有大鼠饲养在无菌
模型大鼠的影响，从 HIF-1α/Bnip3/Beclin1 通路出发初 环境中，温度约为 27 ℃，相对湿度约为 55％，自由进
步分析其可能机制，以期为DOR的临床治疗提供参考。 食。本实验经南昌大学实验动物科学中心伦理委员会
1 材料 批准（批号2020JXFYKY06013）。
1.1 主要仪器 2 方法
本研究所用主要仪器包括XDS-900C型光学显微镜 2.1 加减益经汤的制备
（上海蔡康光学仪器有限公司）、GS-15R型离心机（美国 取熟地黄、党参、菟丝子药材各20 g，丹参、杜仲、北
Beckman 公司）、BIOBASE-EL10A 型酶标仪（山东博科 沙参药材各 15 g，白芍、当归药材各 10 g，柴胡药材 6 g，
再生医学有限公司）、BL2200H 型电子天平（日本 Shi- 加水没过药材并共同煎煮1 h，取滤液，然后将其浓缩成
madzu 公司）、9700 型聚合酶链反应（polymerase chain 高、中、低质量浓度[2.36、1.18、0.59 g/mL（以生药量计）]
reaction，PCR）仪（美国 Bio-Rad 公司）、Lodigit 型 WB 凝 的药液，装瓶冷却后，低温储藏。
胶成像仪（上海天能科技有限公司）等。 2.2 分组、造模与给药
1.2 主要药品与试剂 通过观察阴道脱落细胞切片对比大鼠的动情周期
熟地黄、党参、菟丝子、丹参、杜仲、北沙参、白芍、当 情况。挑选动情周期正常的大鼠 140 只，按随机数字表
归、柴胡药材（批号均为101018）均购自浙江中医药大学 法分为对照组、模型组、阳性对照组、抑制剂组和加减益
中药饮片厂，由江西省妇幼保健院中药房刘迎新副主任 经汤低、中、高剂量组，每组20只。大鼠在实验室适应性
中药师鉴定均为真品；环磷酰胺（批号 756230，纯度≥ 喂养1周后，对照组大鼠股静脉注射等体积生理盐水，其

中国药房2022年第33卷第14期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 14 ·1731 ·