Page 70 - 《中国药房》2022年14期

响应强度 响应强度

化学位移/ppm 化学位移/ppm
A. H-NMR谱 B.重水交换谱
1
图5 目标产物的 H-NMR谱和重水交换谱
1
表3 目标产物CATM的 H-NMR结果（δ/ppm） 4 讨论
1
编号 1 H-NMR 编号 1 H-NMR 4.1 质谱条件
1～4 7.35～7.57（4H，m） 10 3.81～3.86（2H，m） 因为CATM各立体异构体的标准品尚无法商购，不
5 4.71（1H，m） 11 3.63（3H，s）
6 2.90～2.56（2H，m） OH 12.24（1H，brs） 能获得其母离子和子离子信息，所以在 UPLC-MS/MS
7 2.09～1.68（2H，m） SH 3.05（1H，s） 法中将母离子和子离子均设为母离子的质荷比，碰撞能
8 3.81～3.86（1H，m） 其他 8.32（0.2H，s）、5.20（1H，s）、1.91（0.4H，s）、
9 5.90（1H，s） 7.35～7.57（1H，m） 量设为 5 eV。该方法可以使母离子尽量在四极杆的子
离子通道内以原型存在，随后通过离子阱对该母离子进

1.0×10 5 行裂解，得到相应的质谱图，以便进行 CATM 各构型的
26.5（峰4）
鉴定。
8.0×10 4
4.2 CATM制备纯化方法
CATM结构中的巯基基团化学性质活泼，使其制备
intensity/cps 6.0×10 4 纯化较为困难。在进行C18制备柱纯化之前，根据观察，

4
4.0×10
所得到的 CATM 灌流液难以保存，经 0.22 μm 滤膜滤过
27.3（峰5）
2.0×10 4 后得到的澄清液体，在－80 ℃仅能保存7 d左右，故灌流
22.3（峰3）
21.3（峰2）
10.7（峰1） 结束后应尽快对其中的目标产物进行分离纯化，并且制
0
0 5 10 15 20 25 30 备过程中的每个操作都应尽量在 4 ℃和避光环境下进
t/min
行，以防止其失活。在分离纯化过程中，将灌流得到的
图6 CATM的UPLC-MS/MS色谱图
含 CATM 的灌流液在 AKTA pure 型蛋白纯化仪上以流
6.0×10 4 动相的方式上样 100 mL，分 6 次通过 C18制备柱分离纯
化，首先以 97％的水相除去灌流液体系中的无机盐，随
26.3
后通过 55％的水相等度洗脱 CATM，最后以 100％的有
4.0×10 4 机相等度洗脱色谱柱中残留的（S）-2-氧氯吡格雷，洗脱
intensity/cps 收集时间范围为57～64 min。

2.0×10 4 CATM 的转化率为 11.71％，转化率受以下因素影
响：（1）灌流液在肝组织和灌流管路中存在损失；（2）
杂峰 （S）-2-氧氯吡格雷未充分转化；（3）CATM可能以其他结
0 合形式存在；（4）CATM 在制备纯化过程中因结构不稳
15 20 25 30
t/min 定造成损失。本研究中，图 6 与图 2A 相比，色谱峰的峰
图7 受试者体内CATM的UPLC-MS/MS色谱图 形较差，其原因与色谱柱柱效降低有关。本研究通过对

·1728 · China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 14 中国药房 2022年第33卷第14期