Page 70 - 《中国药房》2022年14期
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响应强度                                              响应强度












                           化学位移/ppm                                            化学位移/ppm
                            A. H-NMR谱                                          B.重水交换谱
                             1
                                       图5 目标产物的 H-NMR谱和重水交换谱
                                                       1
            表3 目标产物CATM的 H-NMR结果(δ/ppm)                     4 讨论
                                  1
         编号   1 H-NMR            编号  1 H-NMR                4.1 质谱条件
         1~4  7.35~7.57(4H,m)    10  3.81~3.86(2H,m)            因为CATM各立体异构体的标准品尚无法商购,不
         5    4.71(1H,m)         11  3.63(3H,s)
         6    2.90~2.56(2H,m)    OH  12.24(1H,brs)          能获得其母离子和子离子信息,所以在 UPLC-MS/MS
         7    2.09~1.68(2H,m)    SH  3.05(1H,s)             法中将母离子和子离子均设为母离子的质荷比,碰撞能
         8    3.81~3.86(1H,m)    其他  8.32(0.2H,s)、5.20(1H,s)、1.91(0.4H,s)、
         9    5.90(1H,s)             7.35~7.57(1H,m)        量设为 5 eV。该方法可以使母离子尽量在四极杆的子
                                                            离子通道内以原型存在,随后通过离子阱对该母离子进

              1.0×10 5                                      行裂解,得到相应的质谱图,以便进行 CATM 各构型的
                                           26.5(峰4)
                                                            鉴定。
              8.0×10 4
                                                            4.2  CATM制备纯化方法
                                                                CATM结构中的巯基基团化学性质活泼,使其制备
             intensity/cps  6.0×10 4                        纯化较为困难。在进行C18制备柱纯化之前,根据观察,

                  4
              4.0×10
                                                            所得到的 CATM 灌流液难以保存,经 0.22 μm 滤膜滤过
                                               27.3(峰5)
              2.0×10 4                                      后得到的澄清液体,在-80 ℃仅能保存7 d左右,故灌流
                                        22.3(峰3)
                                   21.3(峰2)
                            10.7(峰1)                        结束后应尽快对其中的目标产物进行分离纯化,并且制
                  0
                   0    5   10   15   20   25   30          备过程中的每个操作都应尽量在 4 ℃和避光环境下进
                                 t/min
                                                            行,以防止其失活。在分离纯化过程中,将灌流得到的
                图6   CATM的UPLC-MS/MS色谱图
                                                            含 CATM 的灌流液在 AKTA pure 型蛋白纯化仪上以流
              6.0×10 4                                      动相的方式上样 100 mL,分 6 次通过 C18制备柱分离纯
                                                            化,首先以 97%的水相除去灌流液体系中的无机盐,随
                                      26.3
                                                            后通过 55%的水相等度洗脱 CATM,最后以 100%的有
              4.0×10 4                                      机相等度洗脱色谱柱中残留的(S)-2-氧氯吡格雷,洗脱
             intensity/cps                                  收集时间范围为57~64 min。


              2.0×10 4                                          CATM 的转化率为 11.71%,转化率受以下因素影
                                                            响:(1)灌流液在肝组织和灌流管路中存在损失;(2)
                           杂峰                              (S)-2-氧氯吡格雷未充分转化;(3)CATM可能以其他结
                  0                                         合形式存在;(4)CATM 在制备纯化过程中因结构不稳
                   15      20       25       30
                               t/min                        定造成损失。本研究中,图 6 与图 2A 相比,色谱峰的峰
           图7   受试者体内CATM的UPLC-MS/MS色谱图                     形较差,其原因与色谱柱柱效降低有关。本研究通过对


        ·1728 ·  China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 14                                 中国药房    2022年第33卷第14期
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