Page 62 - 《中国药房》2022年14期

2 方法与结果 （色谱信息丰富且各色谱峰峰面积适中）为参照，采用中
2.1 色谱条件 位数法生成对照图谱（S1为R1、PF1为R2），设置时间窗
以 Agilent ZORBAX-SB C18 （250 mm × 4.6 mm，5 宽度为0.1，经多点校正后自动匹配，得到栀子饮片及栀
µm）为色谱柱，以乙腈（A）-0.1％甲酸溶液（B）为流动相 子配方颗粒的HPLC叠加指纹图谱。结果显示，20批栀
进行梯度洗脱（0～9 min，7％A→12％A；9～16 min， 子饮片及10批栀子配方颗粒的叠加指纹图谱中均有24
12％ A→19％ A；16～25 min，19％ A→23％ A；25～30 个共有峰，详见图 1、图 2。以 S1 为参照，采用中位数法
min，23％A；30～35 min，23％A→30％A；35～50 min， 生成对照图谱（R3），得到栀子饮片及栀子配方颗粒的叠
30％A→37％A；50～60 min，37％A→58％A）；检测波长 加指纹图谱。结果显示，30批样品的叠加指纹图谱中共
有22个共有峰，详见图3。
为 238 nm（DAAME、栀子苷、苦番红花素、芦丁）、440
nm（西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ）；柱温为30 ℃；流速为1.0 89 13 18 20
10 000 1 23 4 5 6 7 10 1112 15 16 17 19 21 22 23 25 26
mL/min；进样量为10 μL。 9 000
2.2 混合对照品溶液的制备 8 000
7 000
分别取DAAME、栀子苷、苦番红花素、芦丁、西红花 6 000
苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ对照品适量，精密称定，加甲醇溶解， U/mV 5 000
4 000
制成 DAAME、栀子苷、苦番红花素、芦丁质量浓度分别 3 000
2 000
为73.30、610.80、44.60、41.70 μg/mL和西红花苷Ⅰ、西红 1 000
花苷Ⅱ质量浓度分别为148.90、20.03 μg/mL的2种混合 0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
对照品溶液。 t/min
2.3 供试品溶液的制备 图1 20批栀子饮片的HPLC叠加指纹图谱及对照图谱
取样品[栀子饮片粉末（过 40 目筛）约 0.2 g 或栀子
6 8 9 13
配方颗粒（研细）约 0.05 g]，精密称定，置于具塞锥形瓶 3 000 1 23 4 5 7 10 11 12 14 15 16 17 19 2122 23 24 25 26
中，加 70％甲醇 25 mL，称定质量，超声（功率 350 W、频 2 500
率 40 kHz）提取 30 min，冷却至室温，再次称定质量，用 2 000
70％甲醇补足减失的质量，摇匀，经0.22 μm微孔滤膜滤 U/mV 1 500
过，即得。 1 000
2.4 HPLC指纹图谱的建立 500
2.4.1 精密度试验 取“2.3”项下供试品溶液（编号 0
S1），按“2.1”项下色谱条件进样测定6次，以栀子苷（6号 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
t/min
峰）为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰
图 2 10 批栀子配方颗粒的 HPLC 叠加指纹图谱及对
面积。结果显示，各共有峰相对保留时间和相对峰面积
照图谱
的RSD均小于2.8％（n＝6），表明方法精密度良好。
89 13
2.4.2 稳定性试验 取“2.3”项下供试品溶液（编号 9 000 1 23 4 5 6 7 10 1112 15 16 17 19 2122 23 25 26
S1），分别于室温下放置0、2、4、6、8、10 h时按“2.1”项下 8 000
7 000
色谱条件进样测定，以栀子苷（6号峰）为参照峰，计算各
6 000
共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果显示，各共 5 000
有峰相对保留时间和相对峰面积的 RSD 均小于 3.5％ U/mV 4 000
3 000
（n＝6），表明供试品溶液于室温下放置 10 h 内稳定性 2 000
良好。 1 000
2.4.3 重复性试验 取样品（编号 S1），共 6 份，按“2.3” 0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样 t/min
测定，以栀子苷（6号峰）为参照峰，计算各共有峰的相对 图3 30批样品的HPLC叠加指纹图谱及对照图谱
保留时间和相对峰面积。结果显示，各共有峰相对保留 2.4.5 共有峰指认 取“2.2”项下 DAAME、栀子苷、苦
时间和相对峰面积的 RSD 均小于 3.0％（n＝6），表明方 番红花素、芦丁混合对照品溶液4 mL，西红花苷Ⅰ、西红
法重复性良好。 花苷Ⅱ混合对照品溶液 1 mL，置于 10 mL 量瓶中，加
2.4.4 指纹图谱的生成 取20批栀子饮片及10批栀子 70％甲醇定容，另取“2.3”项下供试品溶液，按“2.1”项下
配方颗粒，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1” 色谱条件进样测定，记录色谱图（图 4）。通过与混合对
项下色谱条件进样测定，将所得色谱数据导入《中药色 照品对比，指认出 2 号峰为 DAAME、6 号峰为栀子苷、9
谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）》，分别以S1、PF1 号峰为苦番红花素、11号峰为芦丁、15号峰为西红花苷

·1720 · China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 14 中国药房 2022年第33卷第14期