Page 28 - 《中国药房》2022年14期

表 2 25 种成分的回归方程、线性范围、定量限、检测限 3 讨论
测定结果 3.1 检测方法的选择
目前，仅有文献采用 HPLC 法测定了八味小檗皮制
线性范围/ 定量限/ 检测限/
化学成分 线性方程 r
（ng/mL） （ng/mL） （ng/mL） 剂中小檗碱和没食子酸的含量 [2－4] ，但由于复方制剂的
木兰花碱 Y＝7.371 5X+116 310 0.999 2 11 000.00～110 000.00 16.00 4.80 成分复杂，仅以 1 个或 2 个成分进行成分分析不具有代
药根碱 Y＝9.771 5X+222 344 0.999 2 9 100.00～91 000.00 24.00 7.10
小檗碱 Y＝39.975X+817 841 0.999 5 5 890.00～110 437.50 8.70 2.60 表性。本课题组前期曾尝试采用 HPLC 法同时测定八
巴马汀 Y＝97.517X+124 633 0.999 2 815.00～8 150.00 0.62 0.18 味小檗皮胶囊中的多种成分，但结果发现，大部分成分
蟾蜍色胺 Y＝53.302X+5 420.7 0.999 1 67.50～2 700.00 1.00 0.30 都难以得到有效分离，故本研究充分利用 HPLC-QqQ-
蟾蜍特尼定 Y＝50.803X+245 123 0.999 2 2 109.37～21 093.75 2.38 0.71
胡椒碱 Y＝125.07X+35 518 0.999 2 162.00～9 720.00 2.20 0.66 MS技术的方法学优势对多种成分进行同时测定。通过
甘草酸 Y＝0.201 3X+101.86 0.999 4 450.00～18 000.00 71.20 21.40 对正、负离子模式的探索发现，在正离子模式下，木兰花
阿魏酸 Y＝3.22X－540.07 0.999 0 549.00～3 019.50 22.30 6.70 碱、药根碱、小檗碱、巴马汀、蟾蜍色胺、蟾蜍特尼定、胡
阿魏酸4-O-β-D- Y＝3.157 1X+41 693 0.999 5 10 980.00～61 000.00 5.10 1.50 椒碱、甘草酸的响应值较高，而阿魏酸、阿魏酸4-O-β-D-
吡喃葡萄糖苷
羟基红花黄色素A Y＝0.437 9X+471.82 0.999 3 1 547.00～11 900.00 554.50 166.30 吡喃葡萄糖苷、羟基红花黄色素 A、柯里拉京、甘草素、
绿原酸 Y＝9.925 5X－3 211.2 0.999 7 508.80～3 180.00 10.00 3.00 甘氨胆酸、甘氨鹅脱氧胆酸、甘氨脱氧胆酸等其他17种
没食子酸 Y＝4.604 8X+16 167 0.999 9 11 070.00～61 500.00 24.00 7.00 成分在负离子模式下的响应值较高。在此基础上，还对
诃子鞣酸 Y＝0.887 2X－6 885.5 0.999 1 7 560.00～56 700.00 129.10 38.70 各成分的碎裂电压和碰撞能量进行了优化，最终确定了
柯里拉京 Y＝6.969 4X－9 312.7 0.999 2 1 782.00～9 900.00 87.00 26.00
鞣花酸 Y＝0.341 5X+1 868.6 0.999 1 3 074.00～21 200.00 427.70 128.30 本研究采用的质谱参数。
甘草素 Y＝10.86X+1.907 0.999 1 150.15～900.90 6.56 1.97 3.2 色谱条件的考察
甘草苷 Y＝22.015X+866.8 0.999 1 162.00～2 484.00 1.80 0.54 本 课 题 组 前 期 分 别 考 察 了 CAPCELL PAK（4.6
芦丁 Y＝13.815X－129.07 0.999 2 48.75～487.50 3.00 0.91
槲皮素 Y＝10.65X－72.567 0.999 1 11.40～342.00 10.40 3.10 mm×250 mm，5 μm）和 WondaSil C18-WR（4.6 mm×250
甘氨胆酸 Y＝7.474 5X－67.894 0.999 2 178.00～5 340.00 4.85 1.45 mm，5 μm）色谱柱，结果发现，以 WondaSil C18-WR（4.6
胆酸 Y＝35.524X+4 238.6 0.999 4 532.00～3 040.00 6.80 2.04 mm×250 mm，5 μm）为色谱柱时，各色谱峰的峰形、分离
甘氨鹅脱氧胆酸 Y＝7.053 1X+95.593 0.999 5 50.00～300.00 26.18 7.85
甘氨脱氧胆酸 Y＝7.321 5X－404.82 0.999 1 50.00～3 030.00 31.70 9.50 度均较好。同时考察了甲醇-水、甲醇-0.1％甲酸溶液、甲
熊去氧胆酸 Y＝22.619X+634.39 0.999 2 10.60～318.00 10.00 2.80 醇-5 mmol/L 醋酸铵溶液、甲醇-水（含 0.1％甲酸和 5
表 3 八味小檗皮胶囊中 25 种成分的含量测定结果 mmol/L醋酸铵）、乙腈-0.1％甲酸溶液5个流动相体系，结
（n＝3） 果发现，以甲醇-0.1％甲酸溶液为流动相时，所得色谱峰
批号20190502 批号20210617 批号20211125 的峰形较好、响应值较高。此外，还考察了不同柱温（25、
化学成分 平均含量/ RSD/ 平均含量/ RSD/ 平均含量/ RSD/ 30、35 ℃），结果发现，在3种柱温条件下，所得色谱峰的峰
（mg/g） ％ （mg/g） ％ （mg/g） ％ 面积及峰形相差不大。综合各因素，最终确定了本研究
木兰花碱 16.94 0.36 18.83 2.17 20.82 2.75
药根碱 3.78 2.83 4.79 1.69 5.17 2.33 采用的色谱条件。
小檗碱 9.11 1.34 10.89 2.86 11.43 1.69 3.3 提取条件的考察
巴马汀 0.24 2.37 0.27 2.17 0.30 1.90 本课题组前期分别考察了冷浸、回流和超声 3 种提
蟾蜍色胺 0.20 2.94 0.33 1.77 0.39 2.99 取方法，结果发现，超声提取更加简便、易行，且大部分
蟾蜍特尼定 0.74 2.34 0.95 2.20 1.16 2.18
胡椒碱 0.79 2.19 0.86 1.77 0.89 0.65 成分的提取效率较高。此外，还考察了提取溶剂（20％
甘草酸 3.26 2.62 3.28 2.88 3.35 1.70 甲醇、50％甲醇、70％甲醇、甲醇）、超声时间（15、30、45、
阿魏酸 0.48 2.08 0.64 2.71 0.66 1.52 60 min）和提取溶剂用量（15、25、35、45 mL），根据含量
阿魏酸4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 11.96 2.21 12.64 2.96 13.35 0.33
羟基红花黄色素A 2.30 2.42 2.73 3.00 3.12 2.40 测定结果综合分析，最终确定了本研究采用的供试品溶
绿原酸 0.19 0 0.20 2.94 0.21 2.79 液制备方法。
没食子酸 6.07 2.29 7.61 1.47 8.83 1.13 3.4 含量测定结果分析
诃子鞣酸 10.48 2.42 10.47 1.33 10.42 1.15
柯里拉京 1.64 0.61 1.43 2.02 1.51 2.33 根据 3 批样品的含量测定结果可知，八味小檗皮胶
鞣花酸 4.17 1.00 4.50 1.46 4.76 2.21 囊中木兰花碱、阿魏酸4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、小檗碱、
甘草素 0.14 0 0.15 0 0.15 0 诃子鞣酸等成分的含量较高，而槲皮素、熊去氧胆酸、甘
甘草苷 0.46 2.17 0.50 2.32 0.52 1.10 氨鹅脱氧胆酸等成分的含量较低。
芦丁 0.04 0 0.04 0 0.04 0
槲皮素 0.01 0 0.01 0 0.01 0 综上所述，八味小檗皮胶囊含有多种藏药材，化学
甘氨胆酸 0.59 1.69 0.60 1.67 0.63 1.84 成分复杂多样，相互之间干扰较大，采用常规的 HPLC
胆酸 0.20 2.84 0.21 2.71 0.23 2.55 法难以进行多成分的定量分析。本研究采用 HPLC-
甘氨鹅脱氧胆酸 0.02 0 0.02 0 0.02 0
甘氨脱氧胆酸 0.15 0 0.15 0 0.16 0 QqQ-MS技术首次测定了八味小檗皮胶囊中小檗碱、木
熊去氧胆酸 0.01 0 0.01 0 0.01 0 兰花碱、阿魏酸 4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、羟基红花黄色

·1686 · China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 14 中国药房 2022年第33卷第14期