Page 65 - 《中国药房》2022年13期
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材料，采用离子交换法制备载阿霉素壳聚糖纳米粒                             1.3 细胞
       （DOX-CS-NPs），将 FA 和 氨 基 聚 乙 二 醇 磷 脂（NH2-                人乳腺癌 MCF-7 细胞购于上海生命科学研究所细
        PEG2000-DSPE）通过共价连接后修饰红细胞膜（RBC），                   胞资源库。
        并构建靶向肿瘤细胞FA受体的载阿霉素红细胞膜壳聚                           1.4 动物
        糖靶向纳米粒（FA-RBC-DOX-CS-NPs），考察该纳米粒                       本研究所用动物为健康雄性 SD 大鼠，共 9 只，体质
        的理化性质和体外释药特性，并评价其抗肿瘤活性，以                           量为 180～200 g，鼠龄为 8 周，由浙江省医学科学院提
        期为DOX的新制剂开发提供参考。                                   供，动物生产许可证号为SCXK（浙）2019-0002。实验期
        1 材料                                               间正常光照，动物饲养室环境温度为20～22 ℃，相对湿
        1.1 主要仪器                                           度为55％～60％，大鼠自由饮水采食。
            本研究所用主要仪器有IL-161CT型CO2培养箱[施                    2 方法
        都凯仪器设备（上海）有限公司]，Malvern ZS90型激光纳                   2.1 叶酸氨基聚乙二醇磷脂的合成
        米粒径仪（英国马尔文仪器有限公司），Nicolet 6700 型                       取7.94 mg FA溶于10 mL无水二甲基亚砜（DMSO）
        傅里叶变换红外光谱仪、Fresco 21 型高速冷冻离心机                      中，加入6.9 mg EDC和4.14 mg NHS，室温避光活化4 h，
       （美国 Thermo Fisher Scientific 公司），ELx800 型酶标仪        加入 30 mg NH2-PEG2000-DSPE，避光，室温反应 24 h
       （美国 BioTek 公司），UV-2102 型紫外可见分光光度计                   （具体合成路线见图1），然后置于去离子水中透析（透析
       （美国 Unocal 公司），LSM 900 型共聚焦显微镜（德国                   袋截留相对分子质量为 3 000 Da）36 h，收集产物并冻
        Carl Zeiss 公司），X’pert PRO 型 X 射线衍射仪（荷兰             干，即得叶酸氨基聚乙二醇磷脂（FA-PEG2000-DSPE）。
                                                                              1
        PNAlytical 公司），AVANCE-Ⅲ型核磁共振波谱仪（德国                 采用核磁共振氢谱（H-NMR）表征 FA、NH2-PEG2000-
        Bruker公司）。                                         DSPE和FA-PEG2000-DSPE的结构。
        1.2  主要药品与试剂                                       2.2  RBC的制备
            FA、壳聚糖和三聚磷酸钠（批号分别为 20180607、                       取SD雄性大鼠血液，加入10倍体积的1×磷酸盐缓
        20181009、201812110）购于上海阿拉丁生化科技有限公                  冲液（PBS），于 4 ℃下以 4 500 r/min 离心 10 min，取沉
        司；NH2-PEG2000-DSPE（批号 20181022）购于上海凡硕              淀，以1×PBS洗涤3次，即得红细胞。将红细胞置于4倍
        生物科技有限公司；DOX（批号20180809）购于武汉远成                     体积的 0.25×PBS 中，于 4 ℃下低渗处理 40 min，以释放
        共 创 科 技 有 限 公 司 ；DMEM 高 糖 培 养 基（批 号                红细胞内容物；再以8 000 r/min离心15 min，取沉淀，以
        19126245）购 于 美 国 Sigma 公 司 ；MTT 试 剂（批 号            0.25×PBS洗涤2次，即得粉色的RBC，备用。
        2002316）购于北京索莱宝科技有限公司；DAPI 染色液                     2.3  FA修饰RBC的表征
       （批号20191116）购于上海颖心实验室设备有限公司；1-                          取“2.1”项下 FA-PEG2000-DSPE 适量，以 1×PBS 配
        乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺盐酸盐（EDC，批                       制成质量浓度为 50 µg/mL 的溶液（2 mL），加至等体积
        号 20180928）购于浙江普康化工有限公司；N-羟基琥珀                     RBC溶液中，置于37 ℃、100 r/min摇床上避光孵育1 h；
        酰亚胺（NHS，批号20180821）购于上海麦克林生化科技                     再于4 ℃条件下用1×PBS洗涤离心（8 000 r/min）2次，即
        有限公司；其余试剂为实验室常用规格，水为纯净水。                           得 FA 修饰的 RBC（FA-RBC）。采用傅里叶变换红外光
























                                         图1 FA-PEG2000-DSPE的合成路线


        中国药房    2022年第33卷第13期                                             China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 13  ·1595 ·
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