Page 52 - 《中国药房》2022年13期

the levels of SOD and GSH-Px，the protein expressions of p-PI3K，p-Akt and p-FoxO1 were significantly decreased（P＜0.05）；liver
and kidney organ index，blood glucose level at 0，0.5 and 2 hours after intragastric administration of glucose solution，AUC，
FBG，HbA1c，serum levels of MDA，TC，TG and hepatic glycogen content，liver and pancreatic pathological grade score，the
protein expressions of PEPCK and G6Pase were all increased significantly（P＜0.05）. Compared with model group，the general
condition of rats in P. cocos polysaccharide groups were all improved，and all of above indicators had been reversed to varying
degrees. CONCLUSIONS P. cocos polysaccharide can downregulate protein expressions of PEPCK and G6Pase which are key
enzymes of gluconeogenesis，inhibit hepatic gluconeogenesis，effectively decrease blood glucose levels and regulate glucolipid
metabolism in T2DM model rats by weakening oxidative stress and upregulating PI3K/Akt/FoxO1 pathway.
KEYWORDS Poria cocos polysaccharides；type 2 diabetes mellitus；oxidative stress；PI3K/Akt/FoxO1 pathway；gluconeogenesis

2 型糖尿病占糖尿病发病例数的 90％以上，由 2 型 高速离心机购自德国Eppendorf公司；530活力型手持血
糖尿病导致的并发症大多与患者的高病死率有关 [1－2] 。 糖 仪 购 自 江 苏 鱼 跃 医 疗 设 备 股 份 有 限 公 司 ；
目前，临床上用于治疗糖尿病的双胍类药物具有明显的 WTM-1812D 型膜分离实验设备、ST-2B-1812 型微滤膜
副作用 。而中药在治病救人方面有几千年的历史，更 元件、V0.2-2B-1812型超滤膜元件均购自杭州沃腾膜工
[3]
是在防治2型糖尿病及其并发症方面具有多靶点、多途 程有限公司；FD-1A-50型冷冻干燥机购自北京博医康实
径、个体化等不可替代的优势，因此，寻找标本兼治、副 验仪器有限公司；Eclipse E100型光学显微镜、DS-U3型
作用小、疗效稳定的中药及其有效成分治疗糖尿病是国 成像系统均购自日本Nikon公司。
内外研究的重点。 1.2 药材与试剂
茯苓为多孔菌科真菌茯苓 Poria cocos（Schw.）Wolf 茯苓药材采自湖北省英山县石头咀镇，经湖北中医
[4]
的干燥菌核，具有利水渗湿、健脾、宁心的功效 。糖尿 药大学药学院叶晓川教授鉴定为多孔菌科真菌茯苓 P.
病属中医“消渴症”范畴，而茯苓是中医治疗消渴症的高 cocos（Schw.）Wolf 的干燥菌核。盐酸二甲双胍片（批号
[5]
频用药 。茯苓多糖为茯苓菌核中的主要成分，占菌核 ABU7707，规格0.5 g/片）购自中美上海施贵宝制药有限
[6]
质量的70％～80％ ，具有抗肿瘤、抗炎、保肝、调节免疫 公司；链脲佐菌素（streptozotocin，STZ，批号 301V021，
规格1 g）购自北京索莱宝科技有限公司；三酰甘油（tri-
[7]
等多种药理作用 。有研究报道，茯苓多糖能通过调节
glyceride，TG）、总胆固醇（total cholesterol，TC）、糖化血
肠道菌群来改善肥胖小鼠的糖脂代谢，减轻肝脏脂肪变
红蛋白（glycosylated hemoglobin，HbA1c）、超氧化物歧
[8]
性 。多项研究表明，茯苓多糖可以减轻糖尿病肾病小
化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶
鼠的肾损伤 [9－11] 。在生理条件下，机体血糖水平通过体
（glutathione peroxidase，GSH-Px）、丙二醛（malondialde-
内葡萄糖产生和摄取间的动态平衡来维持稳定。糖异
hyde，MDA）、肝糖原试剂盒（批号分别为 20210423、
生是将一些非糖前体，如乳酸、甘油、生糖氨基酸等转变
20210426、20210422、20210420、20210425、20210426、
为葡萄糖的过程，肝脏糖异生是导致内源性葡萄糖生成
20210420）均购自南京建成生物工程研究所；苏木素-伊
增加的重要原因，而2型糖尿病患者中糖异生作用异常
红（HE）染液套装、RIPA 裂解液（批号分别为 G1003、
[12]
活跃 。目前已有研究证明，抑制肝脏糖异生是治疗 2
CR2103126）均购自武汉赛维尔生物科技有限公司；
型糖尿病的有效策略 。另有研究证实，磷脂酰肌醇3-
[13]
TBST缓冲液（批号21128946）购自合肥白鲨生物科技有
激 酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）/蛋 白 激 酶 B
限公司；兔抗磷酸化PI3K（p-PI3K）、甘油醛-3-磷酸脱氢
（protein kinase B，Akt）/叉头框转录因子 O1（forkhead
酶（GAPDH）（批号分别为 ab182651、ab181602）均购自
box transcription factor O1，FoxO1）信号通路可调节肝脏
英国 Abcam 公司；兔抗磷酸化 Akt（p-Akt）、兔抗磷酸化
糖异生 。本研究主要探讨茯苓多糖是否可以通过调
[14]
FoxO1（p-FoxO1）（批号分别为#4060、#9461）均购自美
节PI3K/Akt/FoxO1通路，抑制糖异生关键酶——磷酸烯 国 CST 公司；兔抗 G6Pase（批号 LS-C446262）购自美国
醇丙酮酸羧化激酶（phosphoenolpyruvate carboxykinase， LSBio公司；兔抗PEPCK（批号14892-1-AP）购自武汉三
PEPCK）和 葡 萄 糖 -6- 磷 酸 酶（glucose-6-phosphatase， 鹰生物技术有限公司；辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔
G6Pase）的蛋白表达，进而调节 2 型糖尿病模型大鼠血 IgG二抗（批号AS1107）购自南非 Aspen 公司；磷酸和氢
糖，以期为阐明茯苓多糖发挥降血糖的作用机制提供数 氧化钠均为食品级；水为纯水。
据支持。 1.3 动物
1 材料 SPF 级 SD 大鼠购自湖北省医学实验动物中心，动
1.1 仪器 物许可证号为 SCXK（鄂）2020-0018，动物合格证号为
LiDE110型凝胶成像仪购自日本Canon公司；Spark 42000600040888。动物实验经湖北中医药大学伦理委
10M型酶标仪购自瑞士Tecan公司；Centrifuge 5810R型 员会批准，批准号为 HUCMS202103009。大鼠饲养于

·1582 · China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 13 中国药房 2022年第33卷第13期