Page 37 - 《中国药房》2022年13期
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光光度计上进行全波长扫描。结果显示，HM 在 240、 pH 值为 2.0；超声水合 30 min（100 W），形成的混悬液用
300 nm 波长处均有较高的吸收，但是 240 nm 波长接近 碳酸钠缓冲液（浓度为150 mmol/L）调节pH值至7.0，磁
于紫外末端，因此，选择 300 nm 作为检测 HM 含量的最 力搅拌（室温，转速200 r/min）2 h，微型脂质体挤出器挤
佳吸收波长。将 HM 标准品溶液用甲醇稀释得到质量 出3次，得KA@HM-LPS 。（3）薄膜分散法：按照质量比
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浓度为 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 μg/mL 的系列溶液，分 10 ∶ 10 ∶ 5 ∶ 1 ∶ 1，精 密 称 取 SPC、DPPC、Chol、DSPE-
别于 300 nm 波长处测定吸光度（A）值，以 A 值对质量浓 PEG2000-KA和HM标准品，用适量有机相溶解，减压旋蒸
度（C）进行线性回归，得HM的回归方程为A＝0.082 8C+ 形成干燥的脂膜，加入有机相1/3体积的去离子水，超声
0.005 2（R ＝0.999 5），表明 HM 检测质量浓度的线性范 水合30 min（100 W），用微型脂质体挤出器挤出3次，得
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围为1～10 μg/mL。 KA@HM-LPS 。
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2.1.2 方法学考察 （1）精密度试验：将“2.1.1”项下制 2.2.2 脂质体的表征 分别对逆相蒸发法、pH 梯度法
备的 HM 标准品溶液用甲醇稀释到质量浓度分别为 4、 和薄膜分散法制备的 KA@HM-LPS 进行表征。（1）分离
6、8 μg/mL（低、中、高浓度），在300 nm波长处分别于0、 效率的测定：精密称取HM标准品5 mg，加入KA@BLPS
12、24 h 检测以考察日内精密度，于 0、24、48、72 h 检测 5 mL，超声 5 min，使之混匀，得到质量浓度为 1 mg/mL
以考察日间精密度，结果显示，低、中、高浓度 HM 的日 的HM物理混合液。取HM物理混合液1 mL，置于超滤
内精密度 RSD 分别为 0.26％、0.25％、0.41％，日间精密 离心管（截留分子量为 10 kDa）中，离心 2 次（转速 6 000
度 RSD 分别为 0.48％、0.17％、0.87％，均小于 2.00％ r/min，每次20 min），每次离心前加入去离子水1 mL，混
（n＝6），说明方法的精密度良好。（2）稳定性试验：取 匀3次。离心结束后，将外管中的游离药物用甲醇定容
“2.2.1”项 下 采 用 薄 膜 分 散 法 结 合 挤 出 法 制 备 的 至 5 mL，测定 HM 的浓度，采用分离效率评价方法的可
KA@HM-LPS 1 mL，分别在室温条件下放置 0、2、4、8、 行 性 。 根 据 公 式 ① 计 算 得 到 分 离 效 率 为（97.00 ±
16、24 h后，用甲醇溶解并定容至50 mL，在300 nm波长 1.67）％，说明超滤法适用于游离 HM 与脂质体的分
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处测定 A 值。结果显示，A 值的 RSD 为 1.97％，小于 离 。因此，采用超滤法测定包封率。（2）包封率的测定：
2.00％（n＝6），说明方法的稳定性较好。（3）重复性试验： 精密量取KA@HM-LPS 1 mL，与上述同法测定其游离
取“2.2.1”项 下 采 用 薄 膜 分 散 法 结 合 挤 出 法 制 备 的 药物的量（W 游离）；另取 1 mL KA@HM-LPS，用甲醇破
KA@HM-LPS 100 μL，用甲醇溶解并定容至 5 mL，在 乳并定容至 50 mL，测定总药物的量（W 总），根据公式②
300 nm 波长处测定 A 值。结果显示，A 值的 RSD 为 计算包封率。（3）载药量的测定：精密量取KA@HM-LPS
1.74％，小于2.00％（n＝6），说明方法的稳定性较好。（4） 1 mL，冷冻干燥 24 h，通过减重法测定 KA@HM-LPS 的
加样回收率试验：从“2.1.1”项下制备的HM标准品贮备 量（WKA@HM-LPS ），根据公式③计算载药量。（4）取 0.5 mL
液中分别精密量取 0.2、0.3、0.4 mL 置于 50 mL 容量瓶 KA@HM-LPS，加0.5 mL 去离子水混匀，分别测定粒径、
中，各加 0.5 mL 空白脂质体（KA@BLPS），用甲醇定容 多分散系数（polydispersity index，PDI）和Zeta电位。
至刻度，得到HM质量浓度分别为4、6、8 μg/mL（低、中、 分离效率＝100％×（初始量－测得量）/初始量
高浓度）的供试品溶液。检测 300 nm 波长处的 A 值，以 … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … 公式①
评价加样回收率。结果显示，低、中、高浓度HM对应的 包封率＝100％×（W 总－W 游离 ）/W 总… … … … 公式②
加样回收率（n＝3）分别为（99.30±0.47）％、（101.00± 载药量＝100％×（W 总－W 游离 ）/WKA@HM-LPS … 公式③
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1.40）％和（104.10±0.33）％，表明方法的准确度较好 。 数据分析应用 SPSS 26.0 软件，计量资料以 x±s 表
2.2 KA@HM-LPS制备方法的选择 示；组间对比时，数据首先采用单因素方差分析，而后采
2.2.1 KA@HM-LPS 的制备 分别采用逆相蒸发法、 用 Tukey HSD 事后检验，并采用 Bonferroni 法校正显著
pH梯度法和薄膜分散法制备 KA@HM-LPS。（1）逆相蒸 性水平的 Tukey HSD 事后检验结果，检验水准α＝0.05。
发法：按照质量比 10 ∶ 10 ∶ 5 ∶ 1 ∶ 1，精密称取SPC、DPPC、 结果显示，逆相蒸发法、pH梯度法和薄膜分散法制备的
Chol、DSPE-PEG2000-KA 和 HM 标准品，用适量有机相 KA@HM-LPS 包封率及载药量差异有统计学意义（P＜
（氯仿-甲醇混合液，体积比2 ∶ 1，下同）溶解，加入有机相 0.001），而粒径差异无统计学意义（P＞0.05）。其中，薄
1/3 体积的去离子水，冰浴超声 2 h（100 W），减压旋蒸 膜分散法制备的KA@HM-LPS包封率和载药量最高（表
（压力 0.05 MPa，转速 100 r/min，下同）至有机溶剂除 1），因此，选择薄膜分散法制备 KA@HM-LPS 用于后续
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尽 ，用微型脂质体挤出器挤出 3 次，得 KA@HM-LPS。 实验。根据薄膜分散法制备的KA@HM-LPS呈负电荷，
（2）pH 梯度法：按照质量比 10 ∶ 10 ∶ 5 ∶ 1 ∶ 1，精密称取 说明其在体内的毒性可能较低。KA@HM-LPS原液（未
SPC、DPPC、Chol、DSPE-PEG2000-KA和HM标准品，用适 经过稀释的脂质体）借助透射电镜观察其形态，如图1所
量有机相溶解，减压旋蒸形成干燥的脂膜，加入有机相 示。由图1 可见，KA@HM-LPS呈类圆形，粒径大小跟粒
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1/3 体积的柠檬酸缓冲液（浓度为 50 mmol/L），此时的 径仪测定的平均粒径相差不大 。另外，将KA@HM-LPS
中国药房 2022年第33卷第13期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 13 ·1567 ·
