Page 38 - 《中国药房》2022年13期
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材料中的 DSPE-PEG2000-KA 替换成 DSPE-mPEG2000，按            含10％胎牛血清的培养基中，于37 ℃恒温孵育24 h，模
        KA@HM-LPS 相 同 的 制 备 方 法 制 备 未 修 饰 脂 质 体             拟生理环境。分别在第 0、1、2、4、6、8、10、12、24 h 时测
        （HM-LPS）。                                           定 KA@HM-LPS 的粒径，观察血清对 KA@HM-LPS 稳
                                                                      [20]
        表 1   不同方法制备所得 KA@HM-LPS 的表征结果                      定性的影响 。结果显示，KA@HM-LPS 的粒径在 12 h
             （x±±s，n＝3）                                     后几乎未再变大，说明稳定性良好。结果见图3。
         方法      粒径/nm     PDI   Zeta电位/mV  包封率/％  载药量/％          230
         逆相蒸发法  225.80±5.69  0.337±0.095  －15.20±1.08  83.60±1.61  4.10±0.25
         pH梯度法  236.20±12.03  0.301±0.040  －17.40±0.61  72.90±0.30  3.20±0.19
         薄膜分散法  211.40±11.67  0.316±0.014  －14.20±0.49  90.50±0.62  4.60±0.14  225

                                                                粒径/nm  220



                                                                  215


                                                                  210
                                                                       0    5    10    15   20    25
                                                                                   时间/h
                                                            图 3 KA@HM-LPS 在模拟生理环境下粒径随时间的
                                                                 变化图
            注：黑色线条代表短径，红色线条代表长径                             2.5  KA@HM-LPS的血浆稳定性评价
                 图1   KA@HM-LPS的透射电镜图
                                                                为评价 KA@HM-LPS 的血浆稳定性，测定其在
        2.3  KA@HM-LPS均质化方法的选择                              20％血浆中的体外释放率。通过眼眶取血法从BALB/c
            分别采用探针超声法和挤出法进行 KA@HM-LPS                       裸鼠采集全血，将 1 mL 裸鼠全血（加抗凝剂）以 2 500
        均质化。（1）探针超声法：将 KA@HM-LPS 置于冰浴中，                     r/min 离心 10 min，吸取最上层的血浆部分，并用生理盐
        探针超声10 min（150 W，工作3 s、停止2 s），共3次。（2）               水按照 1 ∶ 5 稀释，得到 20％的血浆样本。将“2.4”项下
        挤出法：将 KA@HM-LPS 在 37 ℃保温条件下用微型脂                     KA@HM-LPS 冻干粉和游离 HM 分别混悬在 20％的
        质体挤出3次。分别比较2种方法所得KA@HM-LPS的                         BALB/c裸鼠血浆中，调节HM的质量浓度为100 μg/mL，
        粒径和包封率。数据分析和统计方法同“2.2.2”项下。                         体积为2 mL，放入透析袋内（截留分子量为14 kDa），两
        结果显示，与探针超声法相比，挤出法处理的KA@HM-                          端系好，置于含 40 mL 等渗 PBS（pH＝7.4）的 50 mL EP
        LPS包封率较低、粒径较小（P＜0.01），因此，本研究选择                      管中，在 37 ℃恒温条件下以 150 r/min 振摇。分别在第
        挤出法作为均质化方法用于后续实验。结果见图2。                             1、2、4、6、8、10、12、24、48、72 h取样1 mL（每次取样后补
                                                            充同温、等体积、等渗PBS），加甲醇1 mL混匀，采用紫外
                     粒径
                     包封率                                                                            [14]
              300                         a     100         分光光度法测定 HM 的含量，计算体外释放率 。结果
                                    a                       显示，KA@HM-LPS的体外释放率在 72 h 时为（90.80±
                                                            1.28）％，而 HM 在 24 h 时已达到（91.00±1.18）％，详见
              200                                           图 4。此外，将 KA@HM-LPS的体外释放曲线分别与零
             粒径/nm                              50  包封率/％   级、一级、Higuchi 和 Weibull 函数方程拟合，其拟合优度

              100                                           分别为 0.767 1、0.988 9、0.921 3 和 0.996 3，体外释放曲
                                                            线更符合 Weibull 分布，说明 KA@HM-LPS 具有缓释
               0                                 0          效果。
                      挤出法           探针超声法
                                                            2.6 KA@HM-LPS的毒性评价
            a：与挤出法比较，P＜0.01
                                                            2.6.1  血液相容性      为预测 KA@HM-LPS 在体内的血
        图 2 KA@HM-LPS 不同均质化方法结果比较（x±±s，
                                                            液相容性，测定其在 2％红细胞悬液中的溶血百分数。
              n＝3）
                                                            通过眼眶取血法从BALB/c裸鼠采集抗凝全血1 mL，离
        2.4 KA@HM-LPS的血清稳定性评价                               心数次（转速2 500 r/min，时间10 min），每次离心前均去
            首 先 ，取 KA@HM-LPS 5 mL，依 次 在 － 20 ℃ 和            掉上清液，加生理盐水混匀。当上清液变得无色透明
        －80 ℃冰箱中各预冻 12 h；放入冷冻干燥机中，于                         时，加入生理盐水定容至 50 mL，得到 2％红细胞悬液。
        － 55 ℃减压条件下干燥 24 h，得 KA@HM-LPS 冻干                   将“2.4”项下KA@HM-LPS冻干粉用生理盐水制成质量
        粉。精密称取 1 mg KA@HM-LPS 冻干粉，混悬在 3 mL                  浓度为 40、80、120、160、200 μg/mL 的混悬液，加入等体


        ·1568 ·  China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 13                                 中国药房    2022年第33卷第13期
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