Page 39 - 《中国药房》2022年13期

积的 2％红细胞悬液，于 37 ℃保温孵育 2 h。阳性对照 LO2 按照 5 000 个/孔接种至 96 孔板中，并在 5％CO2、
为去离子水，阴性对照为生理盐水。以200 r/min离心5 37 ℃培养箱中培养12 h。按照不同质量浓度[0（空白）、
min，取上清液，采用紫外可见分光光度计在 416 nm 波 25、50、100、200、400 μg/mL]加入 KA@BLPS，继续培养
长处测定 A 值，根据公式④计算溶血百分数 [21－22] 。各质 48 h。另设空白调零组，不加细胞和药物，只加培养基。
量浓度（以 HM 计算）KA@HM-LPS 的溶血百分数分别 每个孔中加入 10 μL CCK-8 孵育 2 h，采用酶标仪在 450
与游离HM（质量浓度为40 μg/mL）对比。 nm波长处测定A值，并根据公式⑤计算细胞存活率。结
溶血百分数＝100％×（A 样品－A 阴性对照）/（A 阳性对照－ 果显示，当 KA@BLPS 的质量浓度达到 400 μg/mL 时，
A 阴性对照 ） … … … … … … … … … … … … … … … … 公式④ LO2细胞的存活率为（94.40±6.12）％，说明载体的毒性
数据分析和统计方法同“2.2.2”项下。结果显示，游 很小，生物相容性较好。结果见图5A。
离HM的质量浓度为40 μg/mL时，KA@HM-LPS的溶血 细胞存活率＝100％×（A 加药组－A 空白调零组）/（A 空白组－
百分数为（5.16±0.19）％；脂质体中 HM 的质量浓度为 A 空白调零组 ）… … … … … … … … … … … … … … … … 公式⑤
40、80、120、160、200 μg/mL 时，KA@HM-LPS 的溶血百 2.7 Legumain 酶过表达对 KA@HM-LPS 作用下细胞
分数分别为（2.54±0.13）％、（3.00±0.19）％、（3.26± 存活率的影响
0.19）％、（4.23±0.19）％、（5.16±0.14）％。将KA@HM- 本课题组前期研究显示，Legumain酶在肝癌细胞中
[13]
LPS 中 HM 的质量浓度为 160 μg/mL 时的溶血百分数 的 表 达 量 低 于 在 肝 癌 组 织 中 的 表 达 量 。 为 进 行
与游离 HM（40 μg/mL）的溶血百分数比较，差异有统计 KA@HM-LPS 的体外特性评价，本研究采用 Legumain
学意义（P＜0.05），表明 KA@HM-LPS 的血液相容性 酶过表达人肝癌细胞系。取人正常肝癌细胞 SK-Hep-1
+
[23]
较好 。 和LGMN -SK- Hep-1，分别按照5 000个/孔接种至96孔
2.6.2 KA@BLPS 对正常肝细胞存活率的影响 为考 板中，5％CO2、37 ℃培养箱中培养 12 h。按照不同质量
察 KA@BLPS 对正常肝细胞的毒性，将人正常肝细胞 浓 度 [0（空 白）、20、40、60、80、100 μ g/mL] 加 入

HM HM
KA@HM-LPS KA@HM-LPS
100 100
80 80
体外释放率/％ 60 体外释放率/％ 60

40
40
20 20

0 0
0 10 20 30 40 50 60 70 0 5 10 15 20
时间/h 时间/h
A. 0～72 h的体外释放率 B. 图A中0～24 h段体外释放率放大图
图4 KA@HM-LPS在20％％血浆中的体外释放率随时间的变化图

120
80 SK-Hep-1细胞
LGMN -SK-Hep-1细胞
+
70
90
60
细胞存活率/％ 60 细胞存活率/％ 50
40
30
30
20
10 a
0
0 25 50 100 200 400 0 20 40 60 80 100
KA@BLPS质量浓度/（μg/mL） KA@HM-LPS质量浓度/（μg/mL）
A. 不同质量浓度KA@BLPS对人正常肝细胞LO2细胞存活率的影响 B. Legumain酶过表达对KA@HM-LPS作用下细胞存活率的影响
a：与LGMN -SK-Hep-1细胞组比较，P＜0.001
+
图5 细胞存活率CCK-8实验结果

中国药房 2022年第33卷第13期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 13 ·1569 ·