Page 51 - 《中国药房》2022年12期

3.7 GA 对 细 胞 中 Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-9、 （H2O2 ）、羟基自由基（HO·）等。在正常的代谢过程中，
cyclin D3和cyclin D1蛋白表达的影响 机体会不断产生 ROS，后者会被一些抗氧化酶（如超氧
与对照组比较，各给药组细胞中 Bcl-2（仅 GA 200 化物歧化酶、过氧化氢酶）和一些具有还原作用的小分
μmol/L 组）、Bax（GA 100 μmol/L 组除外）、caspase-3、ca- 子（如维生素C和还原型谷胱甘肽）所消耗，从而维持机
spase-9（GA 100 μmol/L组除外）的表达水平均显著升高 体氧化与抗氧化的动态平衡 。不同浓度的 ROS 对细
[14]
（P＜0.01 或 P＜0.05），Bcl-2（GA 100、200 μmol/L 组除 胞有着不同的作用：高浓度的 ROS 会破坏质膜的完整
外）、cyclinD1、cyclin D3 蛋白的表达水平均显著降低 性，影响 actin 骨架的动力学稳定性，造成 DNA 损伤，并
（P＜0.01或P＜0.05），且均有一定的浓度依赖趋势。结 导致正常的细胞信号转导机制受损；而低浓度的ROS可
果见图10、图11。
能会促进细胞的增殖和分化，并可能会诱导肿瘤发
[15]
生 。有研究指出，与正常组织细胞相比，肿瘤细胞处
Bcl-2 28 kDa
于较高的氧化还原状态，可通过提高肿瘤细胞的ROS水
平来使其先于正常细胞达到 ROS 的死亡阈值；换言之，
Bax 21 kDa
肿瘤细胞对 ROS 的敏感性高于正常细胞。这一特点使
[16]
ROS 对肿瘤细胞具有一定的选择性杀伤能力 。范桂
cyclin D1 34 kDa
[17]
娟 的研究也证实，在由白藜芦醇衍生物和Cu（Ⅱ）构建
的促氧化体系中，ROS对肝癌细胞HepG2的毒性显著高
cyclin D3 31 kDa
于正常细胞L02。
caspase-3 19 kDa 本研究发现，GA能明显抑制食管癌TE-1细胞的活
力，并且呈一定的时间和剂量依赖趋势；划痕实验和集
caspase-9 35 kDa 落形成实验结果显示，GA能够显著抑制TE-1细胞的集落
形成能力和迁移能力，且其在较低浓度（5～25 μmol/L）就
β-actin 42 kDa
能体现较强的集落形成抑制能力。凋亡检测结果显示，
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ GA处理24 h能明显提高TE-1细胞的凋亡水平，且有随
Ⅰ：对照组；Ⅱ：GA 100 μmol/L 组；Ⅲ：GA 200 μmol/L 组；Ⅳ： 着药物浓度增加而升高的趋势。
GA 300 μmol/L组；Ⅴ：GA 400 μmol/L组；Ⅵ：GA 500 μmol/L组 为了进一步探究 GA 诱导食管癌 TE-1 细胞的凋亡
图 10 不 同 浓 度 GA 对 TE-1 细 胞 Bcl-2、Bax、ca-
机制，本研究检测了经不同浓度 GA 处理后细胞中 ROS
spase-3、caspase-9、cyclin D1、cyclin D3 蛋白表
水平的变化，结果显示，随着GA浓度的增加，TE-1细胞
达影响的电泳图
内的ROS水平也随之提高。随后的Western blot结果显
4 讨论 示，与对照组比较，300～500 μmol/L的GA能使抗凋亡蛋
在我国，食管癌是较为高发的恶性肿瘤之一，由于 白 Bcl-2 蛋白的表达水平显著降低，200～500 μmol/L 的
其发病位置特殊、诱发因素较多、早期症状不明显、传统 GA 能使促凋亡蛋白 Bax 蛋白的表达水平显著上升；同
手术和化疗药物对患者伤害较大等诸多原因，使得其整 时，GA 能够提高 caspase-3、caspase-9 的表达水平，降低
[13]
体治疗水平尚未令人满意 。 cyclin D1、cyclin D3 的表达水平，且有浓度依赖趋势。
ROS 形式多样，如超氧阴离子（O ）、过氧化氢 caspase 家族是含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶的全
2 －
1.4
a Bcl-2 caspase-9 b cyclin D1
caspase-3
1.5 Bax 1.2 0.8 cyclin D3
b b b
1.0 b b 0.6
0.8
蛋白表达水平 1.0 b b b b b 蛋白表达水平 0.6 a b b 蛋白表达水平 0.4 a a b a b b
0.5
0.4
a 0.2 b b b
b
0.2 b
0 0 0
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ
A. Bcl-2与Bax蛋白 B. caspase-3与caspase-9蛋白 C. cyclin D1与cyclin D3蛋白
Ⅰ：对照组；Ⅱ：GA 100 μmol/L 组；Ⅲ：GA 200 μmol/L 组；Ⅳ：GA 300 μmol/L组；Ⅴ：GA 400 μmol/L组；Ⅵ：GA 500 μmol/L组；a：与对照组比
较，P＜0.05；b：与对照组比较，P＜0.01
图11 不同浓度GA对TE-1细胞相关凋亡蛋白表达水平的影响

中国药房 2022年第33卷第12期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 12 ·1453 ·