Page 47 - 《中国药房》2022年12期

pro-apoptotic proteins caspase-3，caspase-9 and Bax，and down-regulation of the expressions of anti-apoptotic protein Bcl-2，cyclin
D1 and cyclin D3.
KEYWORDS gallic acid；esophageal cancer；apoptosis；reactive oxygen；TE-1 cells

食管癌作为全世界发病率和病死率前10位的癌症， 技有限公司），BSA124S 型电子天平（德国 Sartorius 公
其治疗情况和患者预后情况均较差 [1－2] ；特别是在中国， 司），SX-500型高压灭菌锅[天美（中国）科学仪器有限公
食管癌的发病率和病死率分列第 4 位和第 6 位，均超过 司]等。
世界平均水平的2倍 。根据全球癌症观察站的预测结 1.2 主要药品与试剂
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果，我国男性食管癌新发病例数占比将超过全球新发食 GA 对照品（批号 63262，纯度≥98％）购自美国
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管癌病例数的一半 。食管癌患者的早期症状并不明 MCE 公司；胎牛血清、RPMI 1640 培养基、胰蛋白酶（批
显，而当患者出现明显的吞咽梗阻、声音沙哑或淋巴结 号分别为 RB35941、AF29531042、J180022）均购自美国
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肿大则提示其病情已进入晚期 。目前，食管癌的治疗 HyClone公司；Annexin Ⅴ/PI细胞凋亡检测试剂盒（批号
以手术切除、放化疗为主，其中手术切除常伴随着出血、 0315976）购自美国BD公司；MTT试剂（批号0793）购自
穿孔、食管狭窄和感染等多种并发症，而放化疗会引发 合肥白鲨生物科技有限公司；磷酸盐缓冲液（phosphate
营养不良、骨髓抑制、肝肾功能损害和神经系统毒性等 buffered solution，PBS，pH7.4，批号 69092500）购自北京
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明显的毒副作用 。可见，寻找新的治疗方案和新型药 索莱宝科技有限公司；细胞荧光计数（cell fluorescence
物来改善食管癌患者的治疗效果显得尤为重要。 counting kit-F，CCK-F）试 剂 盒 、ROS 荧 光 探 针
没食子酸（gallic acid，GA）的分子式为C7H6O5，是一 （DCFH-DA）试剂盒、特超敏ECL化学发光试剂盒（批号
种多酚类化合物，通常为白色或淡黄色的针状结晶，易 分 别 为 122920210601、S0033S、082020201106），兔 源
溶于水和乙醇，具有抗氧化、抗菌和抗肿瘤等广泛生理 Bcl-2、caspase-3、cyclin D1 单 克 隆 抗 体（批 号 分 别 为
活性 。该成分在自然界中分布广泛，是五倍子、大叶 090220210406、121520210422、020321210405），鼠 源
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桉、红景天等多种传统中药的主要活性成分之一 。已 Bax、caspase-9、cyclin D3、β-肌动蛋白（β-actin）单克隆抗
有研究表明，GA 能够抑制人肺癌 A549 细胞的增殖和 体 （ 批 号 分 别 为 090920210311、090820210407、
迁移，并可通过调节 Janus 激酶/信号转导及转录激活因 021219210413、120319201012），辣根过氧化物酶标记山
子 3（Janus kinase/signal transducer and activator of tran- 羊抗兔免疫球蛋白 G（immunoglobulin G，IgG）二抗、辣
scription 3，JAK/STAT3）信号通路及下游凋亡分子来增 根过氧化物酶标记山羊抗小鼠 IgG 二抗（批号分别为
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强顺铂的抗肿瘤作用 。另有研究表明，GA能够提高活 020821210409、121020210409），以 及 RIPA 裂 解 液 等
性氧（reactive oxygen species，ROS）水平，从而可诱导人 Western blot 相关试剂均购自上海碧云天生物技术有限
胶质母细胞瘤细胞、膀胱癌细胞、人乳腺癌细胞以及黑 公司；二甲基亚砜等其余试剂均购自天津北联试剂厂；
色素瘤细胞的凋亡 [10－12] 。基于此，本研究拟以人食管癌 水为双蒸水。
TE-1 细胞为对象，首先考察 GA 对细胞增殖、迁移和集 1.3 细胞
落形成能力的影响，其次探究该成分对 TE-1 细胞 ROS 人食管癌细胞 TE-1 购自武汉普诺赛生物科技有限
水平的影响，最后根据GA处理后TE-1细胞内凋亡相关 公司，批号为CL-0231。
因子 B 细胞淋巴瘤 2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）、Bcl-2 2 方法
相关 X 蛋白（Bcl-2-associated X，Bax）、胱天蛋白酶 3 2.1 细胞培养
（caspase-3）、caspase-9 以 及 细 胞 周 期 蛋 白 D1（cyclin 将人食管癌TE-1细胞培养于含10％胎牛血清、100
D1）、cyclin D3 的表达水平来探索 GA 治疗食管癌的潜 u/mL 青霉素、100 μg/mL 链霉素的 RPMI 1640 培养基
在机制，以期为该成分抗肿瘤作用的阐释以及食管癌的 中，于 37.5 ℃、5％CO2、饱和湿度条件下培养（培养条件
治疗提供参考。 下同），取对数生长期的细胞进行后续实验。
1 材料 2.2 细胞增殖活性的检测
1.1 主要仪器 采用 MTT 法进行检测。取对数生长期的 TE-1 细
本研究所用的主要仪器包括 Multiskan GO 型全波 胞，调整细胞密度至1×10 个/mL，按每孔100 μL接种于
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长酶标仪（美国 Thermo Fisher Scientific 公司），Cyto- 96孔板中，培养过夜，待细胞贴壁后，分为给药组和对照
FLEX 型 流 式 细 胞 仪（美 国 Beckman Coulter 公 司）， 组（每组设置6个复孔），并另设空白调零孔（不加细胞和
Galaxy 170S型恒温二氧化碳（CO2 ）细胞培养箱、5430型 药物，只加培养基）。给药组加入含 GA 100、200、300、
低温高速离心机（德国Eppendorf公司），Mini-PROTEAN 400、500 μmol/L（浓度依据前期预实验结果设置）的培养
Tetra 型蛋白电泳仪和转膜仪、GS-900 型校准型密度计 基（无双抗）100 μL，对照组加入同体积的培养基。分别
（美国 Bio-Rad 公司），Ti-s 型倒置荧光显微镜（日本 培养 24 h 和 48 h 后，每孔加入 5 mg/mL 的 MTT 试剂 20
Nikon公司），HH-2型电热恒温水浴锅（上海力辰仪器科 μL，孵育2 h；弃去上清液，每孔加入二甲基亚砜200 μL，

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