Page 38 - 《中国药房》2022年12期

表 4 ARC 对 LPS 刺激的 NP-69 细胞上清液中 NO、 下，当上皮屏障受损时，上皮细胞将迅速启动伤口修复
TNF-α、IL-6、IL-1β水平影响的检测结果（x±±s， 机制，以保持上皮屏障的完整性，其中上皮细胞快速迁
n＝6） 移是上皮屏障修复中最早出现且较为重要的修复途径
组别 NO/（μmol/L） TNF-α/（pg/L） IL-6/（ng/L） IL-1β/（ng/L） 之一，这一过程对于受损气道上皮细胞的修复和再生格
[14]
正常组 5.91±0.15 41.67±4.08 8.09±1.28 3.18±1.34 外重要 。上皮细胞迁移受到多种因素的影响，有研究
LPS组 17.98±2.37 a 154.00±18.55 a 12.15±0.90 a 5.48±0.36 a 证实炎症反应可明显抑制气道上皮细胞的迁移 。
[15]
0.1 μmol/L ARC组 10.69±0.31 b 123.00±24.84 b 10.85±1.03 5.32±0.71
1.0 μmol/L ARC组 10.71±0.29 b 122.50±9.90 b 10.26±1.03 b 5.38±0.56 本研究结果显示，不同浓度（0.1、1.0 μmol/L）的
ARC均能促进NP-69细胞的迁移，表明该成分具有促进
a：与正常组比较，P＜0.01；b：与LPS组比较，P＜0.05
细胞迁移的作用。随后，本研究采用LPS刺激NP-69细
表 5 ARC 对 LPS 刺激的 NP-69 细胞中 ZO-1、BD3、
胞以复制细胞炎症损伤模型，以细胞划痕实验再次考察
JAK1、STAT3 mRNA 相对表达量影响的检测结
ARC对NP-69细胞迁移的影响。结果显示，经LPS刺激
果（x±±s，n＝6）
后，细胞损伤脱落，细胞迁移率显著降低，说明炎症环境
组别 ZO-1 mRNA BD3 mRNA JAK1 mRNA STAT3 mRNA 抑制了上皮细胞的黏附和迁移能力；与此同时，细胞上
正常组 1.00±0.00 1.00±0.00 1.00±0.00 1.00±0.00
LPS组 0.50±0.07 a 0.07±0.02 a 0.75±0.08 2.32±1.15 a 清液中炎症介质NO和炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平
0.1 μmol/L ARC组 1.32±0.22 0.67±0.16 0.55±0.15 0.62±0.43 b 均显著升高。经不同浓度ARC预先干预后，NP-69细胞
1.0 μmol/L ARC组 1.91±0.66 b 1.25±0.34 b 0.48±0.11 0.42±0.19 b 损伤有所恢复，细胞迁移率显著升高，细胞上清液中
a：与正常组比较，P＜0.01；b：与LPS组比较，P＜0.01 NO、TNF-α、IL-6水平均有不同程度降低，提示该成分具
表 6 ARC 对 LPS 刺激的 NP-69 细胞中 ZO-1、BD3、 有促进上皮屏障损伤愈合的作用。
JAK1、STAT3 蛋白相对表达量影响的检测结果 有研究指出，ZO-1 是上皮细胞维持细胞极性的重
（x±±s，n＝6） 要结构蛋白，也是鼻黏膜物理屏障的重要构成部分，具
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有防止病原体入侵的重要作用 。在炎症环境下，
组别 ZO-1蛋白 BD3蛋白 JAK1蛋白 STAT3蛋白
正常组 0.36±0.02 0.35±0.11 0.50±0.03 0.48±0.13 NP-69 细胞中 ZO-1 mRNA 和蛋白表达均显著降低，说
LPS组 0.25±0.05 a 0.12±0.01 a 0.46±0.10 0.82±0.16 b 明上皮屏障结构受损、物理屏障功能减弱；预先给予
0.1 μmol/L ARC组 0.84±0.26 c 0.28±0.19 c 0.51±0.13 0.70±0.12 ARC干预后，ZO-1 mRNA和蛋白的表达得以上调，说明
1.0 μmol/L ARC组 0.91±0.24 c 0.68±0.11 c 0.54±0.18 0.56±0.18 d
ARC可以增强鼻黏膜上皮细胞的物理屏障功能。
a：与正常组比较，P＜0.05；b：与正常组比较，P＜0.01；c：与LPS组
BD主要分布于鼻黏膜上皮及呼吸道黏膜下腺体组
比较，P＜0.01；d：与LPS组比较，P＜0.05
织中，是具有独特二硫键的阳离子抗菌肽，其不但可通
过靶向细菌细胞膜和病毒外壳蛋白的方式来快速杀灭
ZO-1 230 kDa
病原微生物，而且可通过提高免疫细胞的活性及趋化性
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BD3 8 kDa 调节作用来增强呼吸道黏膜的防御功能 。近年来，BD
因其独特的组织分布、作用特点及对 URTI 的影响而受
JAK1 132 kDa 到了学者的广泛关注。本研究结果显示，经 LPS 刺激
后，NP-69 细胞中 BD3 mRNA 和蛋白的表达均显著降
STAT3 88 kDa 低，提示在炎症环境中，上皮屏障的抗菌肽表达减少，屏
障的免疫防御功能有所减弱。预先给予 ARC 干预后，
β-actin 42 kDa
BD3 mRNA 和蛋白的表达均明显上调，说明 ARC 可以
正常组 LPS组 0.1 μmol/L 1.0 μmol/L 提高鼻黏膜上皮屏障的免疫防御功能。
ARC组 ARC组
有研究报道，当上皮屏障受损时，在没有任何外界
图5 ARC对LPS刺激NP-69细胞中ZO-1、BD3、JAK1、
刺激或非上皮细胞参与的情况下，受损部位邻近的上皮
STAT3蛋白表达影响的电泳图
细胞能以35～45 μm/s的速度迅速迁移到受损部位并覆
4 讨论 盖受损区域，增加受损区域内的细胞总数，同时可分化
由于引起URTI的高致病性病原体（如冠状病毒、鼻 为具有不同功能的上皮细胞（如基底细胞、黏液分泌细
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病毒、呼吸道合胞病毒等）大多是从口鼻入侵，故覆盖于 胞），从而完成对上皮屏障的修复 。上皮细胞的快速
[12]
鼻腔结构的鼻黏膜是机体与病毒接触的首个部位 。 迁移是由IL-6/JAK1/STAT3蛋白激酶信号通路介导并精
[19]
鼻上皮细胞与内皮细胞组成细胞片层，构成了鼻黏膜的 密调控的 。其中，STAT3 在多种细胞和组织中都有表
第1道屏障，其结构和功能的完整性对于防御病原体经 达，对调节正常细胞的增殖、分化、生存、凋亡均具有重
鼻入侵、维持机体内环境稳态均具有至关重要的作 要作用 。研究表明，特异性敲除 STAT3 基因的肠上皮
[20]
[13]
用 。由于直接与外界相通，鼻黏膜上皮细胞不可避免 细胞不但对葡聚糖硫酸钠盐引起的炎症性肠炎易感，而
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地经常受到细菌、病毒、吸入颗粒物的损伤。正常情况 且使受损上皮屏障的愈合速度也明显减慢 。STAT3可

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