Page 85 - 《中国药房》2022年11期

1 200 4 讨论
G1 G1
G2 G2
1 500 S 1 000 S EP 具有抗病毒、抗癌、抗真菌等药理作用 [15－16] 。近
800 年来，EP的抗肿瘤作用也逐渐受到研究者的关注。研究
1 000 细胞数 600
细胞数 400 发现，EP 可抑制 17β-雌二醇诱导的乳腺癌细胞 MCF-7
[17]
[5]
500
200 的增殖活性 。El-Sherif 等 首次从埃及树脂灵芝菌丝
体中分离得到EP，并发现其在体外可显著抑制乳腺癌细
0 0
0 100 200 300 400 500 600 0 100 200 300 400 500 600 胞MCF-7的增殖。据文献[18]报道，EP可抑制乳腺癌细
相对DNA含量 相对DNA含量 胞SUM-149、MDA-MB-231的增殖，诱导其凋亡，并可抑
A.空白对照组 B. EP-3P 5 μmol/L组
制细胞中蛋白激酶 B、细胞周期蛋白 D1 和原癌基因
1 200 G1 1 000 G1
G2 G2 c-Myc 调控蛋白的表达，从而抑制细胞的迁移和侵袭。
1 000 S 800 S
然而EP的抗肿瘤作用及机制尚不清楚。本课题组在前
800 600
细胞数 600 细胞数 400 期药物筛选时发现，EP的衍生物EP-3P对MDA-MB-231
400 细胞的半数抑制浓度（IC50 ）为（11.29±3.13）μmol/L，对
200 正常人乳腺细胞 CCD-1095Sk 的 IC50 为（54.73±2.48）
200
0 0 μmol/L；而 EP 对 MDA-MB-231 细胞的 IC50 为（20.54±
0 100 200 300 400 500 600 0 100 200 300 400 500 600 1.98）μmol/L。上述结果表明，EP-3P 对 MDA- MB-231
相对DNA含量 相对DNA含量
C. EP-3P 10 μmol/L组 D. EP-3P 20 μmol/L组 细胞增殖的抑制作用明显强于EP，且其对正常乳腺细胞
图5 各组细胞周期分布检测的流式细胞图 的毒性作用较弱。本研究中MTT实验和细胞周期实验
检测结果显示，EP-3P作用后对MDA-MB-231细胞的增
殖有一定抑制作用，可将细胞周期阻滞于G2/M期，还可
Bcl-2 26 kDa
有效抑制细胞的迁移和侵袭，诱导细胞凋亡，并具有一
定的浓度依赖趋势。
Bax 20 kDa Bcl-2 家族是细胞凋亡研究中最重要的癌基因之
一，其在线粒体介导的内源性凋亡通路中起着重要作
[19]
用 。该家族中的 Bcl-2 和 Bax 蛋白分别具有抑制和促
Cyt-C 14 kDa
进细胞凋亡的作用，可通过调节线粒体膜的通透性来调
控线粒体凋亡途径 。在正常状态下，Cyt-C 位于线粒
[20]
caspase-3 32 kDa 体外膜，当外膜通透性增加时，Cyt-C 进入细胞质，引起
caspase 级联放大反应，导致 caspase-3 进入活化状态（即
cleaved-caspase-3）；活化的 caspase-3 可裂解细胞内生物
cleaved-caspase-3 17 kDa
酶结构中的天冬氨酸残基肽键，使酶失活，从而导致细
胞凋亡 。本研究结果显示，EP-3P作用于MDA-MB-231
[21]
MMP-2 72 kDa 细胞后，可以诱导细胞中 Bcl-2、caspase-3 蛋白表达下调
和Bax、Cyt-C、cleaved-caspase-3蛋白表达上调。该结果
提示，EP-3P可能通过上调细胞中Bax蛋白表达、下调细
MMP-9 92 kDa
胞中 Bcl-2 蛋白表达，介导线粒体的内源性途径来诱导
MDA-MB-231细胞凋亡。
GAPDH 37 kDa MMP-2 和 MMP-9 是 MMPs 家族的重要成员，可参
与肿瘤细胞转移的调控。已有相关报道证实，MMP-2和
空白对照组 EP-3P 5 EP-3P 10 EP-3P 20
μmol/L组 μmol/L组 μmol/L组 MMP-9的高表达可能与乳腺癌的高转移潜能有关 [22－23] 。
图6 各组细胞中凋亡和侵袭相关蛋白表达的电泳图 本研究发现，EP-3P可以有效抑制MDA-MB-231细胞中

表4 各组细胞中凋亡和侵袭相关蛋白的表达水平测定结果（x±±s，n＝3）
组别 Bcl-2/GAPDH Bax/GAPDH Cyt-C/GAPDH caspase-3/GAPDH cleaved-caspase-3/GAPDH MMP-2/GAPDH MMP-9/GAPDH
空白对照组 1.37±0.06 0.96±0.13 0.69±0.05 1.38±0.09 0.68±0.03 1.39±0.02 1.36±0.20
EP-3P 5 μmol/L组 1.03±0.19 a 1.24±0.07 a 0.82±0.17 1.46±0.07 0.79±0.08 1.23±0.07 0.93±0.13 a
EP-3P 10 μmol/L组 0.87±0.11 a 1.25±0.08 a 1.06±0.11 a 0.93±0.24 a 1.09±0.11 a 0.55±0.26 a 0.72±0.12 a
EP-3P 20 μmol/L组 0.55±0.13 a 1.54±0.07 a 1.17±0.15 a 0.58±0.06 a 1.19±0.11 a 0.48±0.20 a 0.71±0.09 a
a：与空白对照组比较，P＜0.01

中国药房 2022年第33卷第11期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 11 ·1359 ·