Page 53 - 《中国药房》2022年11期

丁酮 乙醇 丁酮 乙醇 丁酮 乙醇
NaN3 NaN3
6 cm 初始点 初始点 初始点 200条线虫
6 cm
同期化线 M9缓冲液中 食物-10％丁酮 空白NGM培养 在仅含食物的
图2 趋化性测定板制备示意图 虫200条 饥饿1 h 室温下训练30 基室温下饥饿 NGM培养基
（1） （2） min（3） 30 min（4） 中培养16～
40 h，进行趋
化性测试（7）
7次学习分析实验（5－6）
图5 长期学习记忆丁酮训练示意图
同期化线 M9缓冲液中 食物-10％丁酮 在仅含食物的NGM培养基
虫200条 饥饿1 h 室温下训练1 h 中培养30～60 min，进行趋
（1） （2） （3） 化性测试（5） 表 5 各组线虫长期记忆趋化指数的检测结果（x±±s，
n＝200）
1次学习分析实验（4）
图3 短期学习记忆丁酮训练示意图 组别 训练前 训练后
0 h 16 h 24 h 40 h
表 4 各组线虫短期记忆趋化指数的检测结果（x±±s， 空白组 0.130±0.110 0.340±0.125 0.000±0.075 －0.010±0.088 －0.060±0.047
溶剂对照组 －0.080±0.129 0.140±0.114 0.030±0.101 0.020±0.070 0.000±0.022
n＝200） 沙利度胺0.5 mg/mL组 0.090±0.868 0.350±0.143 0.140±0.050 0.020±0.160 －0.030±0.151

训练后 沙利度胺2.0 mg/mL组 0.030±0.003 0.300±0.100 0.080±0.084 －0.010±0.013 0.000±0.004
组别 训练前
0 h 0.5 h 1.5 h 沙利度胺6.0 mg/mL组 －0.030±0.098 0.400±0.166 0.220±0.105 0.050±0.027 0.030±0.072
空白组 0.130±0.077 0.150±0.122 0.080±0.094 0.050±0.054
溶剂对照组 0.020±0.102 0.110±0.117 －0.010±0.103 0.000±0.045 0.6 空白组
沙利度胺0.5 mg/mL组 0.150±0.053 0.220±0.132 0.150±0.100 0.100±0.040 a 溶剂对照组
沙利度胺2.0 mg/mL组 0.080±0.052 0.200±0.068 0.060±0.111 0.080±0.020 0.4 沙利度胺0.5 mg/mL组
沙利度胺6.0 mg/mL组 －0.090±0.084 0.170±0.032 0.150±0.065 0.060±0.070 0.2 a 沙利度胺2.0 mg/mL组
学习指数
0.4 空白组 沙利度胺6.0 mg/mL组
溶剂对照组 0
0.3 a a
沙利度胺0.5 mg/mL组 －0.2
0.2 a 沙利度胺2.0 mg/mL组
学习指数 0.1 沙利度胺6.0 mg/mL组 －0.4 0 10 20 30 40 50

0 时间/h
a：与空白组比较，P＜0.01
－0.1
图 6 沙利度胺对 BR5270 品系线虫长期学习指数的
－0.2
影响
0 0.5 1.0 1.5 2.0
时间/d
2.7 BR5270 品系线虫体内 Gsk-3、Age-1、Akt-1、Clp-1
a：与空白组比较，P＜0.01 基因mRNA的表达水平检测
图 4 沙利度胺对 BR5270 品系线虫短期学习指数的
将 BR5270 品系线虫按“2.5”项下方法进行同期化
影响
处理和分组，继续培养48 h后，采用低温Trizol法提取各
2.6 BR5270品系线虫长期学习记忆能力实验 组线虫的总RNA，再按相应试剂盒说明书方法进行反转
将 BR5270 品系线虫按“2.5”项下方法进行同期化 录得到 cDNA。以 cDNA 为模板，进行实时荧光定量
处理和分组（每组1 000条），培养48 h后，各组取200条 PCR 反应。反应体系为：cDNA 模板 1 μL，TB Green TM
线虫置于不含食物的 NGM 培养基上进行趋化性测试 Premix Ex Taq Ⅱ 10 μL，ROX Reference DyeⅡ 0.4 μL，
TM
（每组平行3个平板），记录每组线虫训练前的趋化指数 上、下游引物各 0.8 μL，RNase free water 7 μL。反应条
（CINaive ）。将各组剩余线虫进行长期学习记忆能力丁酮 件为：95 ℃变性 30 s；95 ℃变性 15 s，52 ℃退火 30 s，
[17]
训练（如图 5 所示） 。最后一次训练完成后，将线虫转 72 ℃延伸 30 s，共 40 个循环。以 actin-1 基因为内参，
移至含食物的 NGM 培养基上进行培养，分别于培养 0、 采用 2 －ΔΔCt 法计算 Gsk-3、Age-1、Akt-1、Clp-1 基因 mRNA
16、24、40 h时，每组取200条线虫进行趋化性测试，并记 的表达水平。实验重复3次。结果显示，与空白组比较，
录各时间点的趋化指数（CI0 h、CI16 h、CI24 h、CI40 h ），再按 沙利度胺各质量浓度组线虫体内Age-1、Akt-1基因（沙利
“2.5”项下公式计算各时间点的学习指数。结果显示，与 度胺 0.5、2.0 mg/mL 组除外）的 mRNA 表达水平均显著
空白组比较，沙利度胺 6.0 mg/mL 组线虫的长期学习指 升高（P＜0.05 或 P＜0.01），Gsk-3（沙利度胺 0.5 mg/mL
数在培养 0、16 h 时均显著升高（P＜0.01）；其余给药组 组除外）、Clp-1基因的 mRNA表达水平均显著降低（P＜
该指数差异无统计学意义，详见表5、图6。 0.05或P＜0.01），结果见表6。

中国药房 2022年第33卷第11期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 11 ·1327 ·