Page 52 - 《中国药房》2022年11期

3个平行。将线虫置于含不同药物的NGM培养基（含食 有反应，如果没有反应则判断为死亡 。结果显示，与
[16]
物）上，于 16 ℃条件下恒温培养 24 h 后，记录各组线虫 空白组比较，对照组和沙利度胺 0.5 mg/mL 组线虫的
的死亡数量。结果显示，溶剂对照组和沙利度胺 10 10％最大寿命显著延长（P＜0.01），且两者的生存率曲
mg/mL组线虫无死亡；当沙利度胺给药质量浓度增加至 线也整体高于空白组；沙利度胺其余各组的10％最大寿
25 mg/mL 时开始有线虫死亡，死亡数为（1.67±0.58） 命差异无统计学意义。后续实验的给药周期比寿命实
条；沙利度胺给药质量浓度为50、100 mg/mL时，线虫死 验短，故将沙利度胺给药质量浓度设置为 0.5、2.0、6.0
亡数分别为（5.00±1.00）、（17.34±2.52）条。这提示沙 mg/mL。结果见表3、图1。
利度胺对线虫的毒性随着质量浓度的增加而增强。因 表 3 沙利度胺对 BR5270 品系线虫寿命的影响（x±±s，
此，为了避免线虫毒理学特征的出现，本研究将沙利度 n＝30）
胺最大给药质量浓度定为15 mg/mL。 组别 10％最大寿命/d 组别 10％最大寿命/d
2.3 BR5270品系线虫的基础慢反应实验 对照组 24.11±0.782 a 沙利度胺2.0 mg/mL组 20.33±1.323
BR5270品系线虫由于Tau蛋白的聚集，表现为从成 空白组 19.67±1.000 沙利度胺6.0 mg/mL组 20.44±1.509
沙利度胺0.5 mg/mL组 23.22±1.093 a 沙利度胺15.0 mg/mL组 19.89±0.928
[11]
年第1天开始就运动不协调、运动神经元轴突缺损 ，因
a：与空白组比较，P＜0.01
此，通过测定线虫的摆动次数，可探究沙利度胺对
BR5270品系线虫运动能力的影响。按“2.1.2”项下方法 100 空白组
将 BR5271、BR5270 品系线虫进行同期化处理，然后于 沙利度胺0.5 mg/mL组
16 ℃条件下培养24 h后，将BR5271品系线虫作为对照 沙利度胺2.0 mg/mL组
组，BR5270 品系线虫分为空白组（不加药物）和沙利度 生存率/％ 50 沙利度胺6.0 mg/mL组
胺不同质量浓度组（0.5、2.0、6.0、15.0 mg/mL），每组 30 沙利度胺15.0 mg/mL组
条，并设 3 个平行。将线虫置于含不同药物的 NGM 培 对照组
养基（含食物）上，于16 ℃条件下培养至成年（培养5 d）
后，测定各组线虫30 s内的摆动次数 。采用GraphPad 0
[15]
0 10 20 30
Prism 8.0.2 统计软件作图，以 SPSS 24.0 统计软件分析 时间/d
实验数据，结果用 x±s 表示；多组间比较采用单因素方 图1 各组线虫的生存率曲线
差分析，组间两两比较采用 LSD-t 检验（方差齐时）或
2.5 BR5270品系线虫的短期学习记忆能力实验
Dunnett’s T3多重比较（方差不齐），检验水平α＝0.05（下
BR5270品系线虫的学习指数与短期学习记忆能力
同）。结果显示，与空白组比较，对照组与沙利度胺2.0、
呈正相关，因此，通过测定各组BR5270品系线虫的学习
6.0、15.0 mg/mL组线虫在30 s内的摆动次数均显著增加
指数，可探究沙利度胺是否能改善 BR5270 品系线虫的
（P＜0.01）。结果见表2。
[17]
短期学习记忆能力 。按“2.1.2”项下方法将BR5270品
表 2 沙利度胺对 BR5270 品系线虫摆动次数的影响
系线虫进行同期化处理，然后将虫卵于 16 ℃培养 4 d
（x±±s，n＝30）
后，分为空白组、溶剂对照组（1％DMSO）、沙利度胺不
组别 摆动次数/次 组别 摆动次数/次
对照组 18.85±1.42 a 沙利度胺2.0 mg/mL组 14.25±0.64 a 同质量浓度组（0.5、2.0、6.0 mg/mL），每组800条，继续培
空白组 10.70±1.30 沙利度胺6.0 mg/mL组 14.75±1.12 a 养 48 h 后，各组取 200 条线虫置于不含食物的 NGM 培
沙利度胺0.5 mg/mL组 12.00±1.30 沙利度胺15.0 mg/mL组 15.65±1.23 a
养基上进行趋化性测试（趋化性测定板制备如图 2 所
a：与空白组比较，P＜0.01
[17]
示），记录每组线虫训练前的趋化指数（CINaive ） 。将各
2.4 BR5270品系线虫的寿命实验
BR5270品系线虫由于Tau蛋白聚集，其生存时间比 组剩余线虫进行短期学习记忆丁酮训练（如图3所示），
[11]
BR5271品系线虫短 ，10％最大寿命可反映药物对线虫 再转移至含有食物的 NGM 固体培养基上进行培养，分
[16]
生存时间的影响 ，因此，通过分析线虫的 10％最大寿 别于培养 0、0.5、1.5 h 时，每组各取 200 条线虫进行趋化
命和生存率曲线，可探讨沙利度胺是否能延长 BR5270 性测试，并记录各时间点的趋化指数（CI0 h、CI0.5 h、CI1.5 h ），
品系线虫的寿命。按“2.3”项下方法将BR5271、BR5270 再计算各时间点的学习指数[学习指数＝CI0 h－CINaive （或
[18]
品系线虫进行同期化处理及分组、给药，并设3个平行， CI0.5 h－CINaive，或 CI1.5 h－CINaive ）]，实验重复 3 次 。结果
于16 ℃条件下进行培养。每隔24 h观察线虫的生存状 显示，与空白组比较，沙利度胺 6.0 mg/mL 组线虫的短
态，并记录线虫的死亡数量，直至各组线虫全部死亡，计 期 学 习 指 数 在 培 养 0、0.5、1.5 h 时 均 显 著 升 高（P＜
算各组线虫10％最大寿命 [15] 。线虫死亡的判断标准：将 0.01）；其余给药组该指数差异无统计学意义，详见表4、
线虫拾取器用酒精灯烧热后，轻触线虫并观察线虫是否 图4。

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