Page 77 - 《中国药房》2022年10期

2.5 相对保留时间的确定 表4 不同色谱仪和色谱柱对白果黄素等成分相对保留
取混合对照品溶液，按“2.2”项下色谱条件连续进样 时间的影响
测定3次，以穗花杉双黄酮为参照物，采用相对保留时间 色谱仪 色谱柱 白果黄素 银杏双黄酮 异银杏双黄酮 金松双黄酮
法定位色谱峰并计算白果黄素、银杏双黄酮、异银杏双 Waters HSS T3 1.07 1.17 1.18 1.29
Cortecs C18 1.09 1.22 1.23 1.35
黄酮、金松双黄酮的相对保留时间（ri/s ）：ri/s=ti/ts （式中，ts Shimadzu HSS T3 1.06 1.16 1.17 1.27
[21]
为参照物的保留时间，ti为待测成分的保留时间） 。结 Cortecs C18 1.09 1.19 1.21 1.31
Thermo HSS T3 1.07 1.16 1.17 1.27
果显示，白果黄素、银杏双黄酮、异银杏双黄酮、金松双
Cortecs C18 1.09 1.20 1.21 1.32
黄酮的平均相对保留时间分别为 1.08、1.18、1.19、1.30， 均值 1.08 1.18 1.20 1.30
RSD分别为1.26％、2.09％、2.23％、2.39％（n＝3）。 RSD/％ 1.23 2.05 2.10 2.40
2.6 耐用性试验
较，计算相对偏差：相对偏差＝（X1－X2 ）/[（X1+X2 ）/2]×
分别考察3种色谱仪（WatersAcquity UPLC H-CLASS、
100％（式中，X1、X2分别为外标法和一测多评法的测定结
Shimadzu Nexera UHPLC LC-30A、Thermo UlitiMate 果） 。结果显示，7批样品两种方法测定结果的相对偏
[21]
3000）和 2 种色谱柱[Waters Acquity UPLC HSS T3（2.1 差在±3.00％以内，表明两者无明显差异 ，见表5。
[21]
mm×100 mm，1.8 μm）、Waters Cortecs UPLC C 18 （2.1 mm× 3 讨论
100 mm，1.6 μm）]对白果黄素、银杏双黄酮、异银杏双黄 现有关于银杏叶双黄酮的定量研究主要集中于银
酮、金松双黄酮相对校正因子和相对保留时间的影响， 杏叶，而对银杏叶片中双黄酮类成分的定量研究少见报
结果见表 3、表 4。由表 3、表 4 可知，白果黄素等 4 种成 道 [22－24] 。本研究关注了银杏叶片中双黄酮类成分的含
分相对校正因子和相对保留时间的 RSD 均小于 4.00％ 量，建立了同时测定5种双黄酮类成分含量的超高效液
（n＝6），表明不同色谱仪和不同色谱柱对白果黄素、银 相色谱-一测多评法，可为银杏叶片的质量评价提供参
杏双黄酮、异银杏双黄酮、金松双黄酮相对校正因子和 考。由于目前中国食品药品检定研究院仅提供穗花杉
相对保留时间的影响较小。 双黄酮对照品，暂无白果黄素、银杏双黄酮、异银杏双黄
表3 不同色谱仪和色谱柱对白果黄素等成分相对校正 酮、金松双黄酮对照品，同时考虑到检测的经济性，所以
因子的影响 本研究选择以穗花杉双黄酮为参照物，计算白果黄素、
色谱仪 色谱柱 白果黄素 银杏双黄酮 异银杏双黄酮 金松双黄酮 银杏双黄酮、异银杏双黄酮、金松双黄酮的相对校正因
Waters HSS T3 0.92 0.99 1.02 0.97 子和相对保留时间。根据赵一懿等 研究方法，用对照
[18]
0.92 0.89 0.96 0.98
Cortecs C18
Shimadzu HSS T3 0.89 0.94 0.92 0.95 品不同浓度点建立一条标准曲线，将待测成分峰面积带
0.88 0.92 0.94 0.94
Cortecs C18 入曲线求得含量，此法较为准确，所以本研究选择采用
Thermo HSS T3 0.93 0.94 0.95 0.93 斜率法计算相对校正因子。
0.90 0.91 0.96 0.94
Cortecs C18
均值 0.91 0.93 0.96 0.95 与单黄酮和黄酮苷相比，双黄酮类化合物极性较
RSD/％ 2.17 3.68 3.52 2.04 小，为了保证该类成分的溶解性，本研究先用二甲基亚
2.7 含量测定 砜溶解各对照品以后，再用甲醇稀释，最终制得对照品
取 7 批银杏叶片样品，按“2.1.3”项下方法制备供试 溶液。
品溶液各 3 份，按“2.2”项下色谱条件进样测定，记录峰 本课题组前期考察了不同提取溶剂（80％甲醇、甲
面积。以穗花杉双黄酮为参照物，按一测多评法计算白 醇、二甲基亚砜）对双黄酮类成分提取效率的影响，结果
果黄素、银杏双黄酮、异银杏双黄酮、金松双黄酮的含 显示，甲醇的提取效率最高，故本研究选择甲醇为提取
量，并与外标法测定结果（穗花杉双黄酮除外）进行比 溶剂；本课题组考察了超声、回流、振荡3种提取方式对

表5 银杏叶片中穗花杉双黄酮等5种银杏双黄酮类成分含量的测定结果
白果黄素 银杏双黄酮 异银杏双黄酮 金松双黄酮 总和/（μg/片）
穗花杉双黄酮/
批号 外标法/ 一测多评法/ 相对偏差/ 外标法/ 一测多评法/ 相对偏差/ 外标法/ 一测多评法/ 相对偏差/ 外标法/ 一测多评法/ 相对偏差/ 外标法/ 一测多评法/ 相对偏差/
（μg/片）
（μg/片） （μg/片） ％ （μg/片） （μg/片） ％ （μg/片） （μg/片） ％ （μg/片） （μg/片） ％ （μg/片） （μg/片） ％
20190302 1.943 0.028 0.028 0. 0.724 0.743 －2.59 0.732 0.728 0.55 0.678 0.670 1.19 4.105 4.112 －0.17
20190303 1.872 0.029 0.029 0. 0.594 0.609 －2.49 0.708 0.704 0.57 0.643 0.635 1.25 3.846 3.849 －0.08
181201 2.942 1.675 1.650 1.50 1.112 1.140 －2.49 2.345 2.332 0.56 1.819 1.798 1.16 9.893 9.862 0.31
190301 0.574 0.151 0.148 2.01 0.219 0.225 －2.70 0.213 0.212 0.47 0.153 0.151 1.32 1.310 1.310 0.
180508 0.207 － － 0.081 0.083 －2.44 0.020 0.020 0. 0.016 0.016 0. 0.324 0.326 －0.62
180509 0.149 0.063 0.062 1.60 0.050 0.051 －1.98 0.140 0.139 0.72 0.117 0.115 1.72 0.519 0.516 0.58
A1902004 11.307 29.358 28.903 1.56 17.966 17.642 1.82 22.542 23.046 －2.21 7.261 7.238 0.32 88.434 88.136 0.34
－：未检出

中国药房 2022年第33卷第10期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 10 ·1223 ·