Page 32 - 《中国药房》2022年9期

点分析了挥发油和乙酸乙酯部位的化学成分 [3－5] 。为更 （水，含有0.05％乙酸和1 mmol/L乙酸铵）-B相[异丙醇-
全面地解决患者提出的该药服药剂量大的问题（说明书 乙腈混合液（1 ∶ 1，V/V）]，梯度洗脱（0～3 min，10％ B→
中规定：每次5片，每日3次），本课题组又富集了祛白片 35％ B；3～6 min，35％ B→85％ B；6～8 min，85％ B→
正丁醇部位，在前期研究的基础上，采用超高效液相色 100％ B；8～11 min，100％ B；11～11.1 min，100％ B→
谱-质谱联用（ultra-performance liquid chromatography- 10％ B；11.1～13 min，10％ B）；流速为0.3 mL/min，柱温
mass spectrometer，UPLC-MS）技术初步确定其化学成 为50 ℃。（2）质谱条件：正、负离子源电压分别为3.7、3.5
分，并从细胞数量、促细胞活力、促黑色素生成3个方面 kV；碰撞气为氮气，压力为 1.5 mTorr；鞘气和辅助气均
研究祛白片正丁醇部位对脱黑色素细胞模型的药效学， 为氮气，鞘气压力为30 psi，辅助气压力为10 psi；毛细管
以期为该制剂的进一步药理机制研究和制备工艺优化 加热温度为 320 ℃；容积加热蒸发温度为 300 ℃。一级
提供依据。 全扫描参数：分辨率为 7×10 ，自动增益控制目标为
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1 材料 3×10 ，最大隔离时间为100 ms，质荷比（m/z）扫描范围为
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1.1 主要仪器 50～1 500。本研究进行正、负离子模式下的全扫描
TM
本研究所用主要仪器有 Q Exactive 型四极杆轨 检测。
道离子阱质谱、Dionex TM UltiMate TM 3000 型 UPLC 仪、 2.1.3 UPLC-MS 分析及结果 取“2.1.1”项下祛白片正
Multiskan FC 型酶标仪（美国 Thermo Fisher Scientific 公 丁醇部位待测样品，按“2.1.2”项下色谱与质谱条件进样
司），COIC XDS-1B型显微镜（重庆重光实业有限公司）， 分析，得正、负离子模式下祛白片正丁醇部位的总离子
RT-TDL-40B 型离心机（无锡市瑞江分析仪器有限公 流图，结果见图 1。将采集好的数据用 Progenesis QI 软
司），YT-CJ-1ND型无菌操作台（北京亚泰科隆仪器技术 件处理，依次进行原始数据导入、峰对齐、峰提取、归一
有限公司），MCO-15AC型CO2培养箱（日本Panasonic公 化处理，最后通过 m/z、保留时间、峰强度等信息，在正、
司）。 负离子模式下初步确定了祛白片正丁醇部位的 53 个化
1.2 主要药品与试剂
合物（正离子模式下 29 个，负离子模式下 33 个，重合 9
炒蒺藜、补骨脂、黑芝麻等 15 味中药饮片均购自北 个），结果见表1、表2。
京金崇光药业有限公司，经我院药检室检验符合 2020
[6]
年版《中国药典》（一部）要求 ；8-甲氧补骨脂素（8- 100 3.40
90 1.51
methoxypsoralen，8-MOP，批号 M3501-1G）、二甲基亚砜
80 1.20
（dimethyl sulfoxide，DMSO，批 号 D2650）、过 氧 化 氢 70 2.15
（H2O2，批 号 H1009-100）和 左 旋 多 巴（L-DOPA，货 号 60 1.02 2.17 7.74 8.04
7.53
72816）均购自美国 Sigma 公司，DMEM 培养基（批号 相对丰度/％ 50 0.82
40
C11965500BT）购自美国 Invitrogen 公司；其余试剂为实 30 2.90 5.54 9.14 9.88
7.40
9.66 10.09
验室常用规格，水为纯净水。 20 3.87 6.92 8.92 10.29
10.50
10 4.45 4.85 6.26 8.77 10.73 11.17
1.3 细胞 0 0.05 5.84 11.87
小鼠B16黑色素瘤细胞（编号3111C0001CCC000324） 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
保留时间/min
购自中国医学科学院基础医学研究所基础医学细胞 A.正离子模式下
中心。 100 7.72
2 方法与结果 90 7.99
80
2.1 祛白片正丁醇部位成分的UPLC-MS分析 70
2.1.1 样品的制备 取炒蒺藜、补骨脂、黑芝麻等 15 味 60
中药饮片，加水煎煮 3 次，每次 1 h，滤过；合并煎液，浓 相对丰度/％ 50
40
缩，即得祛白片干浸膏。参考文献[7]方法，取祛白片干 30
浸膏适量，充分溶解于热水，用等体积正丁醇分 3 次萃 20 1.92 1.96 7.56
10 1.47 1.79 8.25
取，合并萃取液，浓缩，即得祛白片正丁醇部位干浸膏。 0.03 0.81 2.26 2.70 3.87 4.29 5.18 5.53 6.45 7.37 8.50 8.73 9.30 10.34 10.99 11.39 12.95
0
取适量祛白片正丁醇部位干浸膏用甲醇充分溶解， 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
保留时间/min
待测。 B.负离子模式下
2.1.2 UPLC-MS 条件 （1）色谱条件：色谱柱为 Waters 图 1 正、负离子模式下祛白片正丁醇部位的总离子
UPLC HSS T3（100 mm×2.1 mm，1.8 µm）；流动相为A相 流图

·1050 · China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 9 中国药房 2022年第33卷第9期