Page 35 - 《中国药房》2022年9期

2.2.5 促黑色素生成率的检测 参考文献[10]方法进行 进行检测。取对数生长期小鼠 B16 黑色素瘤细胞，按
检测。取对数生长期小鼠B16黑色素瘤细胞，按“2.2.3” “2.2.3”项下方法接种、造模、分组与给药，每组设 5 个复
项下方法接种、造模、分组与给药，每组设5个复孔。各组 孔。各组细胞培养24、48 h后，弃去培养基，以磷酸盐缓
细胞培养24、48 h后，弃去上清液，以磷酸盐缓冲液（pH＝ 冲液（pH＝7.4）洗涤 2 次，每孔加入 TritonX-100 溶液
7.4）清洗 2 次后，加入 1 mol/L NaOH 溶液（不含 DMSO） （1％）90 μL，立即放入－80 ℃冰箱冷冻 30 min，取出后
200 μL，于 80 ℃条件下恒温水浴 2 h，待细胞充分裂解、 室温融化至细胞完全破裂，37 ℃预温后加入L-DOPA溶
黑色素颗粒充分溶解后，采用酶标仪于490 nm波长处测 液（10 g/L）100 μL，于 37 ℃条件下孵育 30 min 后，采用
定各孔 OD，并取平均值，再计算促黑色素生成率[促黑 酶标仪于 490 nm 波长处检测各孔 OD，并取平均值，再
色素生成率＝（OD 给药组－OD 模型组或溶媒组）/OD 模型组或溶媒组× 计算酪氨酸酶活性促进率[酪氨酸酶活性促进率＝
100％]。结果显示，与模型组比较，祛白片正丁醇部位 （OD 给药组－OD 模型组或溶媒组）/OD 模型组/溶媒组×100％]。结果显
各浓度组细胞促黑色素生成率均显著升高（P＜0.01）； 示，与模型组比较，祛白片正丁醇部位各浓度组细胞酪
与溶媒组比较，8-MOP各浓度组细胞促黑色素生成率也 氨酸酶活性促进率均显著升高（P＜0.01）；与溶媒组比
显著升高（P＜0.01）。结果见图4。 较，8-MOP各浓度组细胞酪氨酸酶活性促进率也显著升
2.2.6 酪氨酸酶活性促进率的检测 参考文献[11]方法 高（P＜0.01）。结果见图5。
130
a
a
125 24 h b
a b b
a b b b
120 48 h
115 b
a b
细胞增殖率/％ 105 a a b b
a
110
a
100
95 a
90
85
80
祛白片正丁醇部位
祛白片正丁醇部位
祛白片正丁醇部位
祛白片正丁醇部位 50 μg/mL组 100 μg/mL组 150 μg/mL组 200 μg/mL组 10 μmol/L组 50 μmol/L组 100 μmol/L组 150 μmol/L组 200 μmol/L组
祛白片正丁醇部位
模型组 溶媒组 8-MOP 8-MOP 8-MOP 8-MOP 8-MOP
10 μg/mL组
a：与模型组比较，P＜0.01；b：与溶媒组比较，P＜0.01
图3 各组细胞增殖率的检测结果（x±±s，n＝5）
40
24 h a
35 b
a
48 h b
30 a a b
促黑色素生成率/％ 25 a a a a b b b b b

20

15 a b
a b
10

5
祛白片正丁醇部位
祛白片正丁醇部位
祛白片正丁醇部位
祛白片正丁醇部位
祛白片正丁醇部位 50 μg/mL组 100 μg/mL组 150 μg/mL组 200 μg/mL组 10 μmol/L组 50 μmol/L组 100 μmol/L组 150 μmol/L组 200 μmol/L组
模型组 溶媒组 8-MOP 8-MOP 8-MOP 8-MOP 8-MOP
10 μg/mL组
a：与模型组比较，P＜0.01；b：与溶媒组比较，P＜0.01
图4 各组细胞促黑色素生成率的检测结果（x±±s，n＝5）

中国药房 2022年第33卷第9期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 9 ·1053 ·