Page 48 - 《中国药房》2022年8期
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野生藜芦（藜芦、毛穗藜芦、兴安藜芦）进行化学成分鉴                           2 方法与结果
        定，并采用HPLC法对代表性茋类成分（虎杖苷、氧化白                          2.1 溶液的制备
        藜芦醇、白藜芦醇）进行含量测定，以明确3种野生藜芦                           2.1.1  供试品溶液      取样品粉末（过四号筛）约0.1 g，精
        中茋类成分的差异，为三者的鉴别和质量评价提供                              密称定，置于具塞锥形瓶中，加入50％乙醇25 mL，称定
        参考。                                                 质量，超声（功率250 W，频率40 kHz）处理30 min，放冷，
        1 材料                                                再称定质量，用50％乙醇补足减失的质量，摇匀，取上清
        1.1 主要仪器                                            液，用 0.45 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品
            本研究所用主要仪器包括 UltiMate 3000 型 HPLC                溶液。
        系统（美国 Dionex 公司），Q-Exactive 型高分辨质谱仪                 2.1.2  对照品溶液      取“1.2”项下各对照品适量，精密称
        （美国 Thermo Fisher Scientific 公司），Nexera 液相色谱        定，置于10 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，制成所需质
        仪及配备的 LC-20AD-XR 型四元梯度泵、SIL-20A 型自                  量浓度的混合对照品溶液，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取
        动进样器、CTO-10AS型柱温箱、SPD-M20A型紫外检测                     续滤液，即得。
        器（日本Shimadzu公司），AB135-S型十万分之一分析天                    2.2 色谱与质谱条件
        平（瑞士 Metter Toledo 公司），HH-4 型数显恒温水浴锅                2.2.1  色谱条件 以Apollo C18 （4.6 mm×250 mm，5 μm）
        （常州国华电器有限公司），WR-100型微型粉碎机（鹤壁                        为色谱柱，以乙腈（A）-0.1％甲酸溶液（B）为流动相进行
                                                            梯度洗脱（0～5 min，5％A→10％A；5～20 min，10％A→
        市天冠仪器仪表有限公司）等。
        1.2 主要药品与试剂                                         15％A；20～40 min，15％A→40％A；40～55 min，40％A→
                                                            95％A）；流速为1.0 mL/min；检测波长为306 nm；柱温为
            虎杖苷对照品（批号T15A10F85743，纯度≥98％）、
                                                            35 ℃；进样量为10 μL。
        氧化白藜芦醇对照品（批号R28N6S6681，纯度≥98％）、
                                                            2.2.2  质谱条件     离子源为电喷雾离子源，以负离子模
        白藜芦醇对照品（批号R26J10S94040，纯度≥98％）均购
                                                            式扫描；辅助气体积流量为 30 L/min，辅助气温度为
        自上海源叶生物科技有限公司；桑皮苷A对照品、3′-甲
                                                            200 ℃；喷雾电压为3.50 kV；离子传输管温度为300 ℃；
        氧基白藜芦醇对照品、白藜芦醇-4，3′-O-β-D-二葡萄糖
                                                            碰撞能量为 45 eV；检测方式为一级母离子全扫描和数
        苷对照品、白藜芦醇-4′-O-β-D-葡萄糖苷对照品、氧化白
                                                                                                2
                                                            据依赖的二级子离子扫描（full MS/dd-MS），full MS 分
        藜芦醇-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品、2，3，5，4′-四羟基二
                                                            辨率为 70 000，dd-MS 分辨率为 17 500，扫描范围为 m/z
                                                                               2
        苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品均由本课题组分离自
                                                            110～1 000。
        制，纯度均大于 98％ ；乙腈（色谱纯）购自美国 Thermo
                          [9]
                                                            2.3  定性分析
        Fisher Scientific公司；甲酸、氨水、三氯甲烷、甲醇均购自
                                                            2.3.1  数据处理     通过查阅SciFinder、ChemSpider数据
        天津市津东天正化学试剂厂，均为分析纯；其余试剂均
                                                            库和相关文献，本课题组收集整理了藜芦属植物中各类
        为分析纯或实验室常用规格，水为超纯水。
                                                            化学成分的结构鉴定信息，包括分子式、相对分子量、结
            藜芦、毛穗藜芦、兴安藜芦均为本课题组野外采
                                                            构式和一级、多级质谱信息，含茋类化合物31个、黄酮类
        集，经内蒙古医科大学包保全教授鉴定，分别为藜芦
                                                            化合物42个、酚酸类化合物13个，旨在为化合物的质谱
        （V. nigrum Linnaeus）、毛穗藜芦V. maackii Regel、兴安藜
                                                            鉴定提供参考。运用 Xcalibur 3.0 软件进行质谱数据处
        芦 V. dahuricum（Turcz.）Loes. f.，其具体来源信息见表
                                                            理，通过高分辨质谱计算分子式并推测可能的裂解规
        1。所有植物标本均存放于内蒙古医科大学药学院。藜
                                                            律，质谱误差范围δ≤5×10         －6  ppm。根据分子量和碎片
        芦药材由本课题组自制：取上述3种野生藜芦属植物的
                                                            离子，结合对照品相关信息、相同类型化合物的裂解规
        根及根茎，去除泥沙，于阴凉处干燥，即得。
                                                              [10]
                                                            律 、文献报道的质谱数据           [11－30] 进行结构鉴定。
                 表1 3种野生藜芦样品的来源信息                           2.3.2  分析与鉴定       取藜芦、毛穗藜芦、兴安藜芦供试
         编号 样品   品种鉴定         采集地                  采集日期     品溶液适量，按“2.2”项下色谱与质谱条件进样测定，记
         A1 藜芦   V. nigrum Linnaeus  内蒙古锡林郭勒盟桑根达来镇乌和日沁敖包 2018-07-19  录总离子流图（图1）。共鉴定出31个化合物，其中包括
         A2 藜芦   V. nigrum Linnaeus  内蒙古锡林郭勒盟西乌旗古日斯台额木图山 2018-07-21
         A3 藜芦   V. nigrum Linnaeus  内蒙古锡林郭勒盟东乌旗萨麦苏木  2018-07-22  13 个茋类化合物（化合物 1～13）、11 个黄酮类化合物
         B1 兴安藜芦 V. dahuricum（Turcz.）Loes. f. 内蒙古呼伦贝尔鄂伦春自治旗  2018-08-09  （化合物 15～23、30～31）、4 个有机酸类化合物（化合物
         B2 兴安藜芦 V. dahuricum（Turcz.）Loes. f. 内蒙古呼伦贝尔根河好里堡  2018-08-10  14、25、27、28）、2 个糖苷类化合物（化合物 24、26）、1 个
         B3 兴安藜芦 V. dahuricum（Turcz.）Loes. f. 内蒙古呼伦贝尔额尔古纳市  2018-08-05  巴西苏木素类化合物（化合物 29）。绝大多数化合物为
         C1 毛穗藜芦 V. maackii Regel  内蒙古呼伦贝尔鄂伦春自治旗   2018-08-09
         C2 毛穗藜芦 V. maackii Regel  内蒙古呼伦贝尔根河好里堡    2018-08-10  其中2种或3种野生藜芦所共有，仅2个黄酮类化合物山
         C3 毛穗藜芦 V. maackii Regel  内蒙古呼伦贝尔根河好里堡    2018-08-10  柰酚和木犀草素为兴安藜芦所特有。鉴定结果见表2。


        ·938 ·  China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 8                                    中国药房    2022年第33卷第8期
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