Page 87 - 《中国药房》2022年7期
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目前，常用的增强脂质体循环特性的方法是在其膜                         科技有限公司；其余试剂均为分析纯，水为去离子水。
        表面加入聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG）：PEG 会            2 方法与结果
        在膜表面形成一种水膜壳，阻碍脂质体与血清蛋白的相                           2.1 脂质体的制备
                                   [7]
        互作用，从而减少巨噬细胞摄取 。然而，近年来的研究                          2.1.1  载药脂质体和空白脂质体             采用薄膜分散法制
        发现，PEG化脂质体也可能会诱发血液清除加速                    [8－9] ，具  备脂质体 。（1）载药脂质体（Lip-CA）：将300 mg大豆卵
                                                                   [13]
        有一定的应用缺陷。因此，有必要寻找其他更加合理的                           磷脂、60 mg 胆固醇和 60 mg CA 分别充分溶于 8 mL 二
        涂层材料来增强脂质体的循环特性。白蛋白是血浆中                            氯甲烷后，将上述溶液转移到500 mL茄形烧瓶中，超声
        含量最高的蛋白质，占血浆蛋白的 50％～55％，其通过                        （室温，40 kHz，2 min）使其充分混合，然后经旋转蒸发仪
        维持血浆的渗透压来调节血容量，具有内源性、无毒、非                          减压蒸干溶剂，得到均匀分布于烧瓶内表面的淡黄色薄
        免疫原性、亲水性等特点          [10－11] 。由于脂质体制剂的主要           膜。将烧瓶放入真空干燥箱中（室温，过夜）去除残留有
        给药途径为静脉注射，而白蛋白来自血浆，若将其修饰                           机溶剂。此后，向烧瓶中加入 30 mL 水，并在超声（室
        到脂质体表面后再进入血液循环，将不会受到血液乃至                           温，40 kHz，10 min）条件下使薄膜完全脱落，再将烧瓶放
        整个机体的免疫排斥；更重要的是，某些肿瘤细胞在异                           置于磁力搅拌器中搅拌（45 ℃恒温水浴，2 h），然后离心
        常增殖过程中对白蛋白的需求非常高，细胞表面表达有                           （5 000 r/min，5 min）除去大颗粒后得粗脂质体。粗脂质
                           [12]
        高密度的白蛋白受体 ，故表面修饰有白蛋白的脂质                            体经挤压器分别过 200、100 nm 的聚碳酸酯膜，最终得
        体，可利用富含半胱氨酸的分泌型酸性蛋白通路以“木                           到 Lip-CA，密封后于 4 ℃避光保存。（2）空白脂质体
        马病毒”的方式进入肿瘤细胞，实现对肿瘤的高效、靶向                          （Lip-Blank）：按上述方法制备不含CA的Lip-Blank。
            [12]
        治疗 。鉴于此，本研究以CA为模型药物，制备经牛血                          2.1.2 CTS修饰脂质体 （1）CTS溶液的配制 ：用水配
                                                                                                  [14]
        清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）/壳聚糖（chito-          制 1％乙酸溶液，用 NaOH 溶液调节 pH 至 3.5；精密称取
        san，CTS）双层修饰的CA脂质体（BSA/CTS-Lip-CA），并               50 mg CTS，分多次加入到50 mL乙酸溶液中，边加边搅
        研究其粒径、形态、药物包载、体外释放及储存稳定性等                          拌至完全溶解，于 4 ℃保存，待用。（2）CTS 修饰脂质体
        性能，为脂质体制剂的进一步研究和应用提供参考。                            （CTS-Lip-CA）的制备     [13 － 14] ：将“2.1.1”项下新鲜制备的
        1 材料                                               Lip-CA 用滴定管等体积滴入到 CTS 溶液中，边滴加边
        1.1  主要仪器                                          以 800 r/min 的转速搅拌 2 h，然后透析除去未结合的
            本研究所用的主要仪器有R-1001VN型旋转蒸发仪                      CTS，即得CTS-Lip-CA，密封后于4 ℃避光保存。
       （郑州长城科工贸有限公司），Avanti mini extruder 型脂               2.1.3 BSA/CTS-Lip-CA （1）BSA溶液的配制：精密称
        质体挤出器（上海纳洛捷生物科技有限公司），Zeta sizer                    取 10 mg BSA 溶于 10 mL 水中，室温搅拌至其完全溶
        Nano ZS 型马尔文动态光散射仪（英国 Malvern 公司），                 解，密封，于 4 ℃保存，备用。（2）BSA/CTS-Lip-CA 的制
        H-7800 型透射电子显微镜（日本 Hitachi 公司），Synergy             备 ：取“2.1.2（2）”项下制备好的 CTS-Lip-CA 5 mL，滴
                                                             [14]
        Neo2型全功能微孔板检测仪[安捷伦科技（上海）有限公                        加到BSA溶液中，搅拌2 h，制成BSA/CTS-Lip-CA，密封
        司]，JV-1800PC型紫外-可见分光光度计（上海美谱达仪                     后于4 ℃避光保存，备用。
        器有限公司），VERTEX70型红外光谱仪（德国Bruker公                    2.2  脂质体的表征
        司），D3024R 型台式高速冷冻离心机[大龙兴创实验仪                       2.2.1  粒径及Zeta电位测定         取适量脂质体混悬液，用
        器（北京）股份公司]，BK-FD18S 型真空冷冻干燥机（济                     水稀释至约1 mg/mL，使用马尔文动态光散射仪测定样
        南欧莱博科学仪器有限公司），DZF-6030A 型真空干燥                      品中脂质体的粒径和 Zeta 电位。每个样品平行测定 3
        箱（上海一恒科学仪器有限公司），ZNCL-GS190*90 型                    次。结果，Lip-Blank、Lip-CA、CTS-Lip-CA、BSA/CTS-
        智能磁力搅拌器（巩义市予华仪器有限责任公司），                            Lip-CA 的 粒 径 分 别 为（108.5 ± 0.9）、（125.2 ± 1.3）、
        FRQ-1010HT 型超声波清洗机（杭州法兰特超声波科技                      （148.6±2.1）、（177.8±4.0）nm，Zeta电位分别为（－20.4±
        有限公司），Spring-R30 型实验室纯水系统（厦门锐思捷                    1.5）、（－22.2±0.5）、（25.8±1.1）、（－15.6±1.5）mV。
        水纯化技术有限公司）。                                        结果见图1。
        1.2 主要药品与试剂                                        2.2.2  形态观察      用适量水将新鲜制备的 BSA/CTS-
            CA（批 号 C12722210，纯 度 ＞98％）、CTS（批 号             Lip-CA混悬液进行稀释，然后将其滴在铜网上，用2.0％
        C12317099，分子量为30 kDa）均购自上海麦克林生化科                   磷钨酸染色，并用滤纸吸去多余的染液，将上完样的铜
        技有限公司；大豆卵磷脂（批号20201112）购自国药集团                      网置于滤纸上自然干燥后，采用透射电子显微镜观察粒
        化学试剂有限公司；胆固醇（批号 C2021073，纯度＞                       子微观形态并拍照。结果显示，BSA/CTS-Lip-CA 呈较
        95.0％）购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；BSA                        规则的类球形，表面较为圆整，颗粒之间的尺寸接近，大
       （批号A15702HDK1，纯度＞98％）购自天津希恩思生化                      小较为均匀。结果见图2。


        中国药房    2022年第33卷第7期                                               China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 7  ·849 ·
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