Page 92 - 《中国药房》2022年7期

祛白片（京药制字Z20063383）为首都医科大学附属 限公司。
北京世纪坛医院应用多年的院内制剂。该制剂由炒蒺 1.2 主要药品及其配制
藜、补骨脂、制首乌、黑芝麻等15味中药组成，功效为滋 祛白片组方中药饮片购自北京金崇光药业有限公
补肝肾、活血通络，用于治疗血虚瘀阻、肝郁肾亏、肤失 司，经首都医科大学附属北京世纪坛医院药检室检验符
所养引起的白癜风，临床疗效稳定有效，因患者好评较 合 2020 年版《中国药典》（一部）要求 。根据祛白片处
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多而多年沿用 [1－2] 。因医院制剂室生产规模有限，目前 方称量饮片，按制法得祛白片水煎液，水煎液蒸干后得
产量无法满足临床需求。为使更多患者受益，早日实现 干浸膏（祛白片为水煎液的干浸膏粉碎后压制成片而
祛白片成果转化，笔者团队前期从特征图谱入手建立了 得），粉碎待用。取祛白片干浸膏适量充分溶解于热水，
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祛白片质量标准，分别考察了该制剂全方和挥发油部位 用等体积的乙酸乙酯分3次萃取 ，合并萃取液，回收溶
的药效学，初步证实了该处方的抗白癜风作用 [3－4] 。为 剂干燥后得祛白片乙酸乙酯部位干浸膏。8-MOP（因化
解决患者普遍反映的服药量大的问题（说明书中规定： 学结构简单，易与DNA发生相互作用，生物活性易发挥
每次 5 片，每日 3 次），本研究拟对祛白片进行有效部位 作用 [15－16] ，故选择其为阳性对照药物）供试液的配制：取
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研究，以去除杂质，富集有效成分，进一步提高疗效 。 0.216 2 g 8-MOP加入DMSO溶解至10 mL，配制成含0.1
对中药水提物采用极性从小到大的溶剂提取并追踪各 mol/L 8-MOP的培养液，分装于1 mL EP管中，于－20 ℃
部位活性是获得有效部位和活性化合物的重要途径，如 保存备用，使用时加入无血清 DMEM 培养基稀释至所
青蒿素的活性化合物就是从此研究路径获得的 [6－7] 。本 需浓度。H2O2供试液的配制：取102.1 μL H2O2原液加入
研究选择极性适中、溶解性好的乙酸乙酯作为萃取溶 897.9 μL DMEM 培养基，配制成含 1 mol/L H2O2的培养
剂 [8－12] ，获得祛白片乙酸乙酯部位，采用超高效液相色谱- 液，于－20 ℃保存备用，使用时加入DMEM培养基稀释
质谱联用（ultra performance liquid chromatography-mass 至0.1 mmol/L。
spectrometer，UPLC-MS）技术初步确定祛白片乙酸乙酯 1.3 细胞来源
部位的成分及其相对百分含量，并从细胞数量、细胞活 小鼠 B16 黑色素瘤细胞（编号为 3111C0001CCC-

力情况、黑色素形成、酪氨酸酶活性4个方面初步研究该 000324）购自中国医学科学院基础医学研究所基础医学
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部位对小鼠脱黑色素细胞模型的药效学 ，探讨祛白片 细胞中心。
抗白癜风作用的物质基础，为进一步优化其工艺及用法 2 方法
用量提供理论指导。 2.1 祛白片乙酸乙酯部位成分分析
1 材料 采用UPLC-MS技术对祛白片乙酸乙酯部位进行成

1.1 主要仪器与试剂 分分析。
Dionex TM UltiMate TM U3000 UPLC 仪、Q Exactive TM 2.1.1 样品制备方法 取祛白片乙酸乙酯部位干浸膏
四极杆轨道离子阱 MS 仪均购自美国 Thermo Fisher 适量加甲醇充分溶解后，取 100 µL 置于 200 µL 的内衬
Scientific公司；MCO-15AC型CO2培养箱购自日本Pana- 管中，待测。
sonic 公司；COIC XDS-1B 型倒置生物显微镜购自重庆 2.1.2 UPLC-MS 条 件 （1）色 谱 条 件 ：Waters UPLC
重光实业有限公司；RT-TDL-40B 型低速台式离心机购 HSS T3色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.8 µm），流动相：A（含
自无锡市瑞江分析仪器有限公司；YT-CJ-1ND型无菌操 0.05％乙酸、1 mmol/L 乙酸铵的水溶液）-B（异丙醇-乙
作台购自北京亚泰科隆仪器技术有限公司；血球计数板 腈，体积比 1 ∶ 1），洗脱程序（0～3 min，90％A→65％A；
购自上海求精生化试剂仪器有限公司。 3～6 min，65％A→15％A；6～8 min，15％A→100％B；
8-甲氧补骨脂素（8-methoxypsoralen，8-MOP，批号 8～11 min，100％ B；11～11.1 min，100％ B→90％ A；
M3501-1G）、二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide，DMSO，批 11.1～13 min，90％A），柱温50 ℃，流速0.3 mL/min。（2）
号 D2650）、H2O2（批 号 H1009-100 mL）、TritonX-100 质谱条件：正、负离子源电压分别为 3.7、3.5 kV；毛细管
L-DOPA（货号72816）均购自日本Sigma公司；DMEM培 加热温度为 320 ℃；鞘气、辅助气、碰撞气均为氮气，其
养基（批号 C11965500BT）购自美国 Invitrogen 公司；胎 中鞘气压力为 30 psi，辅助气压力为 10 psi，碰撞气压力
牛血清（货号 900-108）购自美国 Gemini 公司；1％青霉 为 1.5 mTorr。溶剂热蒸发温度为 300 ℃。一级全扫描
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素 - 链 霉 素（货 号 151401223）购 自 美 国 Gibco 公 司 ； 参数：分辨率为7×10 ，自动增益控制目标为3×10 ，最大
CCK-8（货号CK04）购自日本Dojindo公司；磷酸盐缓冲 隔离时间为 100 ms，质荷比扫描范围为 50～1 500。液
液（PBS，pH＝7.4，货号 P1020）购自北京索莱宝科技有 质系统由Xcalibur 2.2 SP 1.48软件控制。

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