Page 72 - 《中国药房》2022年7期

未炮制样品及其炮制品的 DPPH 自由基清除率，具体 著降低（P＜0.05）。由此可知，与衢枳壳酒炙和蜜制样
计算公式为 DPPH 自由基清除率（％）＝（1－A1/A0 ）× 品相比，衢枳壳未炮制样品及其他炮制品均具有较好的
100 [31－32] ，然后再通过 GraphPad Prism 9.0 软件计算半数 总还原能力。结果见表4。
抑制浓度（IC50 ）。结果显示，衢枳壳未炮制样品及其炮 表4 不同炮制方法对衢枳壳总还原能力的影响（x±±s，
制品对 DPPH 自由基的 IC50拟合情况较好，拟合系数均 n＝3）
大于 0.90。另外，衢枳壳煮制、麸制、麸炒样品的 IC50均 衢枳壳样品 吸光度值 衢枳壳样品 吸光度值
较低，表明这 3 种炮制品对 DPPH 自由基的清除能力较 未炮制样品 0.234±0.079 a 麸炒样品 0.168±0.065 a
蒸制样品 0.144±0.058 a 麸制样品 0.140±0.050 a
强。结果见表3。
煮制样品 0.146±0.064 a 蜜制样品 0.086±0.019 ab
表3 不同炮制方法对衢枳壳自由基清除能力的影响 醋炙样品 0.147±0.049 a 抗坏血酸 1.159±0.039 b
+
清除DPPH自由基 清除ABTS 自由基 酒炙样品 0.121±0.034 ab
衢枳壳样品
IC50/（mg/mL） 拟合系数 IC50/（mg/mL） 拟合系数 a：与抗坏血酸比较，P＜0.05；b：与未炮制样品比较，P＜0.05
未炮制样品 16.78 0.973 7 6.94 0.982 0 3 讨论
蒸制样品 12.75 0.966 8 2.03 0.975 7
煮制样品 7.49 0.963 9 1.76 0.983 0 浙江衢州地区产出的衢枳壳已入选“新浙八味”药
醋炙样品 18.30 0.970 5 8.99 0.932 1 材培育名单，然而目前衢枳壳在枳壳销售市场中所占份
酒炙样品 10.48 0.986 4 4.70 0.995 1 额较低，且相关研究较少。经笔者查询发现，在 2015 年
麸炒样品 10.22 0.948 1 5.71 0.982 7 版《浙江省中药炮制规范》中收录了衢枳壳未炮制样品
麸制样品 8.37 0.974 9 2.72 0.997 5
蜜制样品 13.40 0.952 5 8.88 0.991 1 及其麸炒、麸制、蜜制样品的炮制方法和质量评价标
[4]
2.4.3 不同炮制方法对衢枳壳清除 ABTS 自由基能力 准 。因此，在此基础上，本研究根据该炮制规范并结合
+
[1]
+
的影响 将 7 mmol/L ABTS 溶液与 2.5 mmol/L 过硫酸 2020年版《中国药典》中所述的炮制方法 ，采用蒸制、煮
钾溶液以1∶1（体积比）混匀，置于暗处，在室温条件下反 制、醋炙、酒炙等7种方法对衢枳壳未炮制样品进行炮制
+
应 12 h，即得到 ABTS 混合溶液；用蒸馏水将上述 并考察其炮制品的品质。
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+
ABTS 混合溶液稀释 10 倍，即得 ABTS 工作液。取 本研究结果显示，尽管经过不同方法炮制后，衢枳
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“2.4.1”项下待测样品各1 mL，加入ABTS 工作液2 mL， 壳炮制品中柚皮苷、新橙皮苷的含量与其未炮制样品相
混匀，置于室温条件下反应10 min，采用紫外-可见分光 比均有所下降，但仍符合 2015 年版《浙江省中药炮制规
光度计于 734 nm 波长处检测其吸光度值，记为 A 样品；以 范》中炮制衢枳壳的相关要求。经蜜制、麸制和煮制后
无水乙醇代替待测样品，同法检测吸光度值，记为A 空白； 的衢枳壳炮制品中柚皮苷含量较高，分别为（4.83±
以无水乙醇代替 ABTS 工作液，同法检测吸光度值，记 0.37）、（4.61±0.74）、（4.31±0.84）mg/mL，经过煮制、麸
+
为 A 对照。每组实验平行检测 3 次，计算衢枳壳未炮制样 制和蜜制的衢枳壳炮制品中新橙皮苷含量较高，分别为
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品及炮制品的 ABTS 自由基清除率，具体计算公式为 （4.39±0.67）、（4.10±0.80）、（4.09±0.43）mg/mL。进一
+
ABTS 清除率（％）＝[1－（A 样品－A 对照 ）/A 空白]×100 [33－34] ，再 步研究不同炮制方法对衢枳壳抗氧化活性的影响，结果
计算 IC50。结果显示，衢枳壳煮制、蒸制和麸制样品的 发现，衢枳壳未炮制样品及其炮制品均具有一定的清除
+
IC50均较低，表明上述3种衢枳壳炮制品对ABTS 自由基 自由基能力以及总还原力，但其对 DPPH 自由基和
+
+
较为敏感，可在较低浓度下达到清除ABTS 自由基的目 ABTS 自由基的IC50存在较大差异。衢枳壳未炮制样品
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的。结果见表3。 及其炮制品对ABTS 自由基的IC50均小于对DPPH自由
2.4.4 不同炮制方法对衢枳壳总还原力的影响 分别 基的 IC50，这可能是由于衢枳壳中水溶性和醇溶性的抗
+
取“2.4.1”项下待测样品（质量浓度均为 16 mg/mL）2.5 氧化活性成分均可被 ABTS 自由基清除法检测，而
mL 于试管中，加入 0.2 mol/L 磷酸盐缓冲液（pH6.6）2.5 DPPH 自由基清除法仅针对有机溶剂体系 [36－37] 。经煮
mL，混匀；再加入 1％铁氰化钾溶液 2.5 mL，置于 50 ℃ 制、麸制和麸炒的衢枳壳炮制品对DPPH自由基的清除
水浴条件下反应 20 min 后，迅速置于冰水中，加入 10％ 能力较好（IC50分别为 7.49、8.37、10.22 mg/mL），这可能
三氯乙酸溶液 2.5 mL，混匀，静置；取上清液 2.5 mL，加 是由于衢枳壳经过上述3种方法炮制后，样品中的抗氧
入 1％ 三氯化铁溶液 0.5 mL 和蒸馏水 2.5 mL，混匀，以 化活性成分能够提供更多电子与DPPH自由基的孤对电
4 000 r/min 离心 15 min，取上清液，采用紫外-可见分光 子配对，使吸光度值降低。经煮制、蒸制、麸制后的衢枳
+
光度计于 700 nm 波长处测定吸光度值 。以抗坏血酸 壳炮制品对 ABTS 自由基的清除能力较好（IC50分别为
[33]
代替待测样品为对照组，同法检测。吸光度值越高，表 1.76、2.03、2.72 mg/mL）。
明样品的总还原力越强 。每组实验平行检测3次。采 综上所述，衢枳壳经炮制后的药效指标成分含量均
[35]
用 SPSS 17.0 统计软件对实验数据进行 Duncan’s 多重 有所降低，但均符合2015年版《浙江省中药炮制规范》相
差异显著性分析，检验水准α＝0.05。结果显示，与衢枳 关要求，且部分炮制品的抗氧化活性较未炮制样品有所
壳未炮制样品比较，其酒炙和蜜制样品的吸光度值均显 增强。

·834 · China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 7 中国药房 2022年第33卷第7期