Page 71 - 《中国药房》2022年7期

2.3 柚皮苷和新橙皮苷的含量测定 2.3.8 加样回收率试验 取同一未炮制样品粉末0.1 g，
2.3.1 色 谱 条 件 色 谱 柱 为 Waters SunFire C18 （250 共 6 份，分别加入柚皮苷和新橙皮苷质量浓度均为
mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为0.1％磷酸溶液-乙腈（80∶20， 0.125 mg/mL 的混合对照品溶液（由“2.3.2”项下混合对
V/V）；检测波长为 283 nm；流速为 1.0 mL/min；柱温为 照品溶液稀释而得）5 mL，超声提取 4 h 后，用 0.45 μm
30 ℃；进样量为10 μL。 微孔滤膜过滤，取滤液按“2.3.1”项下色谱条件进样分
2.3.2 混合对照品溶液的配制 精确称取柚皮苷和新 析，记录峰面积并计算加样回收率。结果显示，柚皮苷
橙皮苷对照品各5.0 mg于同一棕色量瓶中，用90％乙醇 和新橙皮苷的平均加样回收率分别为99.52％、99.47％，
溶解并定容至 10 mL，即得上述 2 种成分质量浓度均为 RSD分别为1.06％、1.37％。
0.5 mg/mL的混合对照品溶液。 2.3.9 含量测定 分别取衢枳壳未炮制样品及其炮制
2.3.3 供试品溶液的配制 将衢枳壳未炮制样品及其 品，按照“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.3.1”
炮制品分别用粉碎机粉碎，过100目筛后，精确称取各样 项下色谱条件进样分析，记录峰面积并按外标法计算各
品粉末10.0 g，分别用100 mL 90％乙醇超声（功率200 W， 成分含量。每种样品平行操作3 次，结果见表2。
频率40 kHz，下同）萃取4 h，过滤，取滤液用90％乙醇定 表2 不同炮制方法制备的衢枳壳炮制品中柚皮苷和新
容至100 mL；取1 mL该溶液用无水乙醇稀释2倍，再以 橙皮苷的含量测定结果（x±±s，n＝3，mg/mL）
0.45 μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。 衢枳壳样品 柚皮苷 新橙皮苷
2.3.4 精密度试验 取“2.3.2”项下混合对照品溶液 6 未炮制样品 4.92±0.53 4.82±0.21
份，每份2.0 mL，分别于0、24、72 h时按“2.3.1”项下色谱 蒸制样品 4.03±0.72 4.00±0.26
煮制样品 4.31±0.84 4.39±0.67
条件进样分析，记录峰面积，并计算日内精密度和日间
醋炙样品 4.30±0.50 4.08±0.86
精密度的RSD。结果显示，柚皮苷和新橙皮苷的日内精 酒炙样品 4.15±0.29 3.58±0.43
密度 RSD 分别为 1.19％、1.23％，日间精密度 RSD 分别 麸炒样品 4.13±0.46 3.18±0.22
麸制样品 4.61±0.74 4.10±0.80
为2.01％、1.97％，表明该方法精密度良好。
蜜制样品 4.83±0.37 4.09±0.43
2.3.5 重复性试验 取同一未炮制样品粉末 0.1 g，共 6
根据 2015 年版《浙江省中药炮制规范》中炮制衢枳
份，分别按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，然后按
壳的相关要求：按干燥品计算，衢枳壳药材及其炮制品
“2.3.1”项下色谱条件进样分析，记录峰面积并按外标法
中柚皮苷不得少于 4.0％，新橙皮苷不得少于 3.0％。由
计算柚皮苷和新橙皮苷含量。结果显示，柚皮苷和新橙
表2可见，衢枳壳未炮制样品及其炮制品中柚皮苷和新
皮苷含量的 RSD 分别为 2.31％、2.53％，表明方法的重
橙皮苷的含量均符合该要求，其中柚皮苷的含量从高到
复性良好。
低依次为未炮制样品＞蜜制样品＞麸制样品＞煮制样
2.3.6 稳定性试验 将“2.3.2”项下混合对照品溶液用
品＞醋炙样品＞酒炙样品＞麸炒样品＞蒸制样品；新橙
90％乙醇分别稀释成质量浓度为 5.0、2.5、0.5 mg/mL 的
皮苷含量从高到低依次为未炮制样品＞煮制样品＞麸
溶液，再将混合对照品溶液及其稀释溶液于－80 ℃条件
制样品＞蜜制样品＞醋炙样品＞蒸制样品＞酒炙样品＞
下放置30 d后，考察长期稳定性。将上述混合对照品溶
麸炒样品。由此可知，衢枳壳经炮制后，其中柚皮苷和
液及其稀释溶液于 25 ℃条件下放置 8 h后，考察短期稳
定性。将上述混合对照品溶液及其稀释溶液经3次冷冻 新橙皮苷的含量均有所降低，这与文献[30]报道的结果相
（－80 ℃）-解冻（25 ℃）循环后，考察冻融稳定性。结果显 一致。在所有炮制方法中，经蜜制、麸制和煮制的衢枳壳
示，在上述实验条件下，混合对照品溶液及其稀释溶液 炮制品中的柚皮苷、新橙皮苷含量均高于其他炮制品，表
中柚皮苷和新橙皮苷含量的 RSD 均小于 15％，表明上 明这3种炮制方法对衢枳壳药效成分的保留效果较好。
述检测样品中柚皮苷和新橙皮苷的稳定性良好。 2.4 不同炮制方法对衢枳壳抗氧化活性的影响
2.3.7 线性关系的考察 精密称取“2.3.2”项下混合对 2.4.1 待测样品的制备 向衢枳壳未炮制样品及其炮
照品溶液5 mL，用无水乙醇稀释成柚皮苷和新橙皮苷质 制品粉末中加入无水乙醇适量，均分别制成质量浓度为
量浓度均分别为 0.500、0.250、0.125、0.063、0.031、0.016 2.0、4.0、8.0、16.0、32.0 mg/mL 的系列混悬液，于常温密
mg/mL的线性工作溶液，按“2.3.1”项下色谱条件进样分 闭环境下静置24 h后超声20 min，然后以5 000 r/min离
析，记录2种成分的峰面积。以各成分质量浓度为横坐 心5 min，取上清液，即得待测样品。
标（x）、峰面积为纵坐标（y）进行线性拟合。结果，柚皮 2.4.2 不同炮制方法对衢枳壳清除DPPH自由基能力的
苷的回归方程为y＝67 774 134x－171 433（r＝0.999 3）， 影响 分别取“2.4.1”项下待测样品 1.5 mL，加入 80
线性范围为 0.016～0.500 mg/mL；新橙皮苷的回归方程 μg/mL DPPH-乙醇溶液 1.5 mL，反应 30 min，采用紫外-
为 y＝41 914 299x+134 326（r＝0.999 0），线性范围为 可见分光光度计于 517 nm 波长处检测吸光度值，记为
0.016～0.500 mg/mL。这表明上述2 种成分在各自检测 A1；以无水乙醇替代待测样品为空白组，同法检测吸光
质量浓度范围内的线性关系均良好。 度值，记为 A0。每组实验平行检测 3 次，再计算衢枳壳

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