Page 75 - 《中国药房》2022年7期

0.01），and pathological damage of brain tissue was improved. CONCLUSIONS SZJN can significantly improve the learning and
memory ability of AD model mice，and alleviate the pathological injury and oxidative stress of brain tissue，which may be related
to the activation of CREB/BDNF signaling pathway.
KEYWORDS Alzheimer’s disease；Shenzao jiannao oral liquid；neuroprotection；oxidative stress；CREB/BDNF signaling
pathway

阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）是一种中 司；Nissl 染色试剂盒（批号 C0117）、苏木素伊红染色试
枢神经系统退行性疾病，临床表现为记忆衰退、认知能 剂盒（批号C0105S）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）试
[1]
力丧失和行为障碍 。β-淀粉样蛋白（β-amyloid protein， 剂盒（批号 S0131S）、超氧化物歧化酶（superoxide dis-
Aβ）级联假说是目前公认的 AD 主要发病机制，该假说 mutase，SOD）试剂盒（批号 S0101S）均购于上海碧云天
认为Aβ在大脑皮层和海马区异常沉积形成的老年斑对 生 物 技 术 有 限 公 司 ；兔 抗 BDNF 多 克 隆 抗 体（批 号
神经细胞具有不可逆的毒性作用，可造成海马神经元损 bs-0248R）、兔抗 CREB 多克隆抗体（批号 bs-0035R）、兔
[2]
伤，进而导致AD发生 。因此，减轻脑内神经损伤、改善 抗磷酸化CREB（p-CREB）多克隆抗体（批号bs-0036R）、
脑内微环境对治疗AD具有重要意义。 兔抗β-actin 多克隆抗体（批号 bs-0061R）和辣根过氧化
环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（cAMP response ele- 物酶标记的山羊抗兔 IgG 二抗（批号 bs-0294P-HRP）购
ment binding protein，CREB）/脑 源 性 神 经 营 养 因 子 于北京博奥森生物技术有限公司；氢溴酸东莨菪碱（批
（brain-derived neurotrophic factor，BDNF）信号通路在神 号 S107418）购于上海阿拉丁生化科技股份有限公司。
经元保护与再生、突触形成及学习记忆能力改善等方面 其余试剂为实验室常用规格，水为纯净水。
均发挥着重要的调节作用，激活 CREB/BDNF 信号通路 1.3 动物
能够抑制 AD 病理微环境对海马神经元的损伤，发挥神 本研究所用动物为 SPF 级昆明小鼠，雌雄各半，体
[3]
经保护作用 。 质量 28～30 g，购于辽宁长生生物技术股份有限公司，
参枣健脑口服液（Shenzao jiannao oral liquid，SZJN； 动物生产许可证号为SCXK（辽）2020-0001。本单位（辽
国药准字B20020138）由人参、酸枣仁、淫羊藿、熟地黄等 宁中医药大学）使用实验动物的许可证号为SYXK（辽）
9 味中药组成，目前在临床上主要用于治疗神经衰弱引 2019-0004。本研究已通过辽宁中医药大学动物伦理审
起的失眠多梦、神疲乏力等症。据报道，睡眠紊乱可加 查，批号为SYXK（辽）2019-0004。
速脑内 Aβ的沉积并诱导神经元的变性与丢失，从而诱 2 方法
导或加速 AD 的进程，故改善睡眠将有助于大脑神经损 2.1 分组、造模与给药
伤的恢复 。此外，相关研究表明，人参、酸枣仁、淫羊 将小鼠随机分为假手术组、模型组、盐酸多奈哌齐
[4]
藿、熟地黄、天麻等中药及其有效成分均具有良好的神 片组（0.65 mg/kg，剂量根据临床成人等效剂量换算而
经保护作用 [5－9] 。但SZJN是否具有改善AD的作用还有 得，临用时以 0.05％羧甲基纤维素钠溶液制成混悬液）
待进一步研究。 和SZJN低、中、高剂量组（0.3、1.5、7.5 g/kg，以生药量计，
基于此，笔者采用 Aβ 1-42联合氢溴酸东莨菪碱制备 中剂量根据临床成人等效剂量换算而得），每组12只，雌
AD小鼠模型，探讨SZJN对该模型小鼠的神经保护作用 雄各半。各组小鼠灌胃相应药物（假手术组和模型组小
及其潜在的作用机制，以期为SZJN用于AD的临床治疗 鼠灌胃等体积水），每日2次，连续28 d。在给药第15天
提供实验依据。 时，参考文献[10]方法复制小鼠AD模型：将小鼠麻醉后
1 材料 固定于脑立体定位仪上，将头顶部切口暴露前囟，参照
1.1 主要仪器 Franklin 和 Paxinos 小鼠立体定位图谱，以前囟为基准，
本研究所用主要仪器有：MS-1 型水迷宫分析系统 向后0.2 mm、向右1.0 mm、深度2.5～3 mm钻开颅骨；模
（成都仪器厂），Ti-S 型荧光倒置显微镜（日本 Nikon 公 型组和 SZJN 各剂量组小鼠右侧脑室缓慢注入 Aβ 1-42蛋
司），MR-96A 型酶标仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有 白溶液（1 μg/μL）3 μL，注射速度为 0.5 μL/min，留针 5
限公司），UV-5600型紫外-可见光分光光度计（上海元析 min，以保证 Aβ 1-42充分扩散并减少回流；假手术组小鼠
仪器有限公司），PowerPac Universal Power Supply 型通 同法注入等体积生理盐水。术后，各组小鼠腹腔注射氨
用电泳仪、Trans-Blot SD 型半干式蛋白转膜仪（美国 苄西林（100 mg/kg），每日 2 次，连续 2 d，以预防感染。
Bio-Rad 公司），SH-510 型凝胶成像系统（杭州申花科技 给药第22天，水迷宫实验开始前，模型组和SZJN各剂量
有限公司）。 组小鼠腹腔注射氢溴酸东莨菪碱（1 mg/kg），假手术组小
1.2 主要药品与试剂 鼠腹腔注射等量生理盐水，连续6 d。
SZJN（批号180301，含药量0.397 g/mL）购于吉林通 2.2 Morris水迷宫实验
化仁民药业股份有限公司；盐酸多奈哌齐片（批号 各组小鼠灌胃给药第22天时，进行Morris水迷宫实
1707043，规格 10 mg/片）购于卫材（中国）药业有限公 验，历时6 d；第1～5天为训练阶段，每天训练1次，每次

中国药房 2022年第33卷第7期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 7 ·837 ·