Page 68 - 《中国药房》2022年6期

μg/mL 的混合母液。取上述混合母液适量，用甲醇稀 的血浆样品，按照“2.4.3”项下方法进行预处理，按照
释，得盐酸小檗碱质量浓度分别为 3 232、1 616、1 010、 “2.4.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以待测成
606、202、101、50.50、25.25 ng/mL，青蒿素质量浓度分别 分的质量浓度（x）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线
为 1 280、640、400、240、80、40、20、10 ng/mL 的系列混合 性回归，得盐酸小檗碱的回归方程为y＝0.977 3x+1.289 3
对照品溶液。 （r＝0.999 3）、青蒿素的回归方程为y＝0.707 0x+0.366 7
2.4.3 血浆样品预处理 取血浆样品100 μL，置于2 mL （r＝0.999 6），二者检测质量浓度的线性范围分别为
的 EP 管中，加入乙腈 400 μL，涡旋 1 min 并静置 15 min 12.63～1 616、5～640 ng/mL，定量下限分别为 12.63、5
后，于4 ℃下以12 000 r/min离心15 min，取上清液，空气 ng/mL。
吹干，残渣用甲醇200 μL复溶，于4 ℃下以10 000 r/min 2.4.6 精密度与准确度考察 按“2.4.5”项下方法配制
离心10 min，取上清液10 μL进样。 盐酸小檗碱、青蒿素定量下限和低、中、高质量浓度（盐
2.4.4 专属性考察 分别取大鼠空白血浆、空白血浆+ 酸小檗碱 12.63、25.25、303、1 212 ng/mL，青蒿素 5、10、
混合对照品溶液（盐酸小檗碱 606 ng/mL、青蒿素 80 120、480 ng/mL）的质控样品，每个质量浓度平行6份，按
ng/mL）、灌胃青连宁心胶囊后 0.75 h 的血浆样品，按照 照“2.4.3”项下方法进行预处理，按照“2.4.1”项下色谱条
“2.4.3”项下方法进行预处理，按照“2.4.1”项下色谱条件 件进样测定，计算批内精密度和批内准确度（分别以
进样测定，记录色谱图（图1）。结果显示，盐酸小檗碱的 RSD、RE 表示，下同）；连续测定 3 d，计算批间精密度与
出峰时间约为 6.8 min，青蒿素的出峰时间约为 17.8 批间准确度（表4）。结果显示，盐酸小檗碱的批内、批间
min，二者峰形对称，与相邻峰的分离度分别为 28.96、 RSD均不超过6.50％，RE均在±10.00％内；青蒿素的批
4.46，内源性物质对其测定无干扰。 内、批间RSD均不超过8.00％，RE均在±8.00％内，符合
2.4.5 线性关系与定量下限考察 取“2.4.2”项下不同 2020年版《中国药典》（四部）的要求 。
[22]
质量浓度的系列混合对照品溶液各100 μL，分别加入空 2.4.7 提取回收率试验 按照“2.4.5”项下方法配制盐
白血浆 100 μL，配制成盐酸小檗碱质量浓度分别为 酸小檗碱质量浓度分别为25.25、303、1 212 ng/mL，青蒿
12.63、25.25、50.50、101、303、505、808、1 616 ng/mL，青 素质量浓度分别为10、120、480 ng/mL的血浆样品，每个
蒿素质量浓度分别为5、10、20、40、120、200、320、640 ng/mL 质量浓度平行6份，按照“2.4.3”项下方法进行预处理，按
800 900 1 000
700 750
600 600 800
500 450 600
mAU 400 mAU 300 mAU 400 青蒿素
300
200 150 200 盐酸小檗碱
100 0
0 －150 0
3 6 9 12 15 18 21 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 19.0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20
t/min t/min t/min
A.空白血浆（201 nm） B.空白血浆（345 nm） C.空白血浆＋混合对照品（201 nm）
盐酸小檗碱
1 800 750
1 500 600 1 500 盐酸小檗碱
1 200 1 000
900 450
mAU 600 mAU 300 mAU 500
300
0 青蒿素 0
－300 150 盐酸小檗碱
－600 －500
－900 0 －1 000
2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 19.0
t/min t/min t/min
D.空白血浆+混合对照品（345 nm） E.血浆样品（201 nm） F.血浆样品（345 nm）
图1 青蒿素和盐酸小檗碱定量分析的高效液相色谱图
表4 盐酸小檗碱和青蒿素的精密度与准确度试验结果
批内试验（n＝6） 批间试验（n＝3） 提取回收率
待测成分 理论质量浓度/（ng/mL）
实测质量浓度（x±s）/（ng/mL） RSD/％ RE/％ 实测质量浓度（x±s）/（ng/mL） RSD/％ RE/％ 回收率（x±s）/％ RSD/％
盐酸小檗碱 12.63 13.79±0.89 6.45 9.18 13.55±0.84 6.20 7.28
25.25 26.00±1.02 3.92 2.97 25.69±1.58 6.15 1.74 93.58±2.95 3.15
303. 295.33±6.20 2.10 －2.53 292.46±8.21 2.81 －3.48 88.56±5.76 6.50
1 212. 1 243.54±28.10 2.26 2.60 1 233.86±22.87 1.85 1.80 94.38±5.46 5.79
青蒿素 5. 4.68±0.29 6.20 －6.40 4.89±0.38 7.77 －2.20
10. 10.52±0.79 7.51 5.20 10.71±0.75 7.00 7.10 87.74±3.12 3.56
120. 115.86±3.94 3.40 －3.45 117.58±5.71 4.86 －2.02 91.92±3.66 3.98
480. 470.49±17.08 3.63 －1.98 473.09±23.89 5.05 －1.44 88.31±2.62 2.97

·702 · China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 6 中国药房 2022年第33卷第6期