Page 57 - 《中国药房》2022年6期

Interactions
Conventional Hydrogen Bond
Carbon Hydrogen Bond
Unfavorable Donor-Donor
Pi-Alkyl

A.毛蕊花糖苷

Interactions
Carbon Hydrogen Bond
Pi-Cation
Pi-Anion
Pi-Pi T-shaped
Alkyl
Pi-Alkyl

B.酮康唑
图4 毛蕊花糖苷、酮康唑与CYP3A4的对接模式图
与 PHE-215、PHE-108 具有π-π堆积作用，与 ARG-106、 间接印证体外抑制实验。
GLU-374 具有π-阳离子静电相互作用，其咪唑环与 影响肝微粒体体外孵育反应的条件主要有肝微粒
ARG-105、ARG-375 具有π-阴离子静电相互作用。毛蕊 体浓度、底物种类及浓度、孵育时间以及再生系统，这些
花糖苷和阳性抑制剂酮康唑与CYP3A4的结合自由能分 条件在实验中相互影响、相互制约。为了使肝微粒体孵
别为－10.2、－12.4 kcal/mol（1 kcal＝4.19 kJ）。结合自由 育反应的结果更加准确、可靠，本课题组前期尽可能地
能绝对值越大，代表体系能量越稳定，结合能力越强 。 优化了孵育体系的反应条件。（1）肝微粒体浓度：为了使
[20]
3 讨论 代谢产物的形成速率与孵育时间、肝微粒体浓度成线
酶抑制作用是预测药物相互作用的常用核心指标， 性 [24－25] ，本实验以不同肝微粒体浓度（0.2、0.5、0.8 mg/mL）
[21]
被认为是研究药物代谢的关键 ，因此近年来关于药物 进行孵育，选择了代谢产物产量高且线性关系良好的
对CYP酶的抑制作用研究较常见，且多以促进临床安全 0.5 mg/mL作为最终的肝微粒体浓度。（2）底物种类及浓
用药为目的 [22－23] 。本课题组以毛蕊花糖苷对 CYP 酶的 度：因肝微粒体种属不同、体内外抑制条件不同，选择的
抑制作用为机制研究的切入点，探究毛蕊花糖苷对睾酮 底物种类也不同，故应根据《美国食品药品监督管理局
[16]
水平调节的影响：首先以毛蕊花糖苷为研究对象，采用 药物相互作用评价指南》 及CYP酶的种属对应关系选
经典的大鼠肝微粒体体外孵育体系，借助快速灵敏的 择合适的底物，这样才能得到较为准确的结果；同时在
UPLC-MS/MS 分析方法并结合探针底物法，对 CYP 酶 浓度方面，因为选择的底物种类可能不同，故不宜直接
探针底物的代谢产物进行测定，综合评估了毛蕊花糖苷 照搬文献记载的浓度，而应当在保证规定的底物清除
[26]
对大鼠肝微粒体中6种CYP酶活性的影响；随后根据体 率 范围内，设定均匀的若干个浓度点进行考察以选择
外抑制实验结果，借助计算机辅助技术，针对性地将 最优解。因本实验涉及底物较多，具体优化浓度过程不
CYP3A4 酶分别与毛蕊花糖苷、阳性抑制剂酮康唑进行 做赘述。（3）孵育时间：通常肝微粒体实验所用的孵育时
分子对接，计算并比较两者的亲和力。由体外抑制实验 间为 5～60 min，但不同底物反应速率差异性大。为达
结果可知，毛蕊花糖苷对大鼠肝微粒体中CYP3A4酶有 到各CYP酶的最佳代谢产物量，本实验考察了每个CYP
[27]
中等强度抑制作用，而对其他 5 种 CYP 酶的抑制作用 酶的孵育反应时间，并以文献数据 为参照，选择±10
弱。由分子对接计算出的结合自由能可知，毛蕊花糖苷 min 进行优化预实验，最终确定最优孵育时间（表 1）。
和阳性抑制剂酮康唑与CYP3A4酶的结合能力相当，且 （4）再生系统：对于肝微粒体来说，烟酰胺腺嘌呤二核苷
可通过氢键、疏水作用等方式发生相互作用，其结果可 酸磷酸二钠、葡萄糖-6-磷酸-二钠及葡萄糖-6-磷酸脱氢

中国药房 2022年第33卷第6期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 6 ·691 ·