Page 74 - 《中国药房》2022年5期
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随着液质联用技术的发展，超高效液相色谱-四极                          质量扫描范围为 m/z 50～1 000；毛细管电压为 4 000 V；
        杆-飞行时间串联质谱联用（UPLC-Q-TOF/MS）技术在                      雾化器压力为 35 psi；裂解电压为 135 V，锥孔电压为
        中药成分分析中的应用越来越多，该技术可提供化合物                            65 V；干燥气温度为 320 ℃；干燥气流量为 10 L/min，鞘
        准分子离子峰的精确质量数及丰富的碎片信息，能更可                            流气流量为11 L/min；碰撞能量为20、40 V。
        靠地表征未知化合物的结构。因此，该技术常常作为中                            2.3 供试品溶液的制备
        药成分定性或相对定量分析的首选技术，从而实现对中                                取当归饮片适量，粉碎，过 40 目筛。精密称取粉末
        药化学成分的快速识别和鉴定 。前期，本课题组分别                            2.0 g，加入20 mL 70％乙醇溶液，超声（功率360 W，频率
                                   [1]
        采用不同体积分数的甲醇和乙醇作为提取溶剂，以色谱                            40 kHz）提取 30 min，以 10 000 r/min 离心 5 min，吸取 2
        峰的数量、响应值和峰形为评价指标，对当归的提取工                            mL 上清液于 10 mL 容量瓶中，用 70％甲醇溶液定容，
        艺进行了优化，最终确定以70％乙醇为溶剂进行供试品                           即得。
        溶液的制备。本研究拟在前期研究基础上，进一步采用                            2.4 混合对照品溶液的制备
        UPLC-Q-TOF/MS技术对当归70％乙醇提取液中的苯酞                          精密称取洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、正丁基苯酞、
        类等化合物进行研究，并结合文献和有关资料，通过对                            洋川芎内酯 A、Z-藁本内酯和欧当归内酯 A 对照品各 1
        苯酞类和有机酸类等化合物的分析和总结，为这些化合                            mg，分别置于10 mL容量瓶中，用70％甲醇溶液定容，得
        物的定性分析提供一种快速、有效的方法，同时也为当                            各单一对照品母液。分别取上述单一对照品母液 0.5
        归药材的质量控制提供可靠依据。                                     mL，置于同一 10 mL 容量瓶中，用 70％甲醇溶液定容，
        1 材料                                                制成各成分质量浓度均为0.005 mg/mL的混合对照品溶
        1.1 主要仪器                                            液，混匀后备用。
            1290 Infinity型UPLC仪、6545型四极杆串联质谱仪               2.5  当归化学成分分析
        均购自美国 Agilent 公司；BSA224S-CW 型电子分析天                      取“2.3”项下供试品溶液和“2.4”项下混合对照品溶
        平购自德国 Sartorius 公司；KQ-300VDE 型双频数控超                 液适量，分别按“2.1”“2.2”项下色谱、质谱条件进样测
        声波清洗器购自昆山市超声仪器有限公司；Eppendorf                        定，利用 Qualitative Analysis 10.0 软件获取化合物的保
        Centrifuge 5418 型离心机购自德国 Eppendorf AG 公司；           留时间、准分子离子峰的精确质量数及二级碎片等信
        Synergy UV型超纯水制备系统购自美国Millipore公司。                  息，通过与对照品质谱图比对，并结合相关文献报道、质
        1.2  主要药品与试剂                                        谱裂解规律及 Chemspider、MassBank、PubChem 等数据
            当归饮片购自国药乐仁堂河北药业有限公司（批号                          库信息对化合物进行分析。结果，从当归中鉴定或推断
        20041701，产地为甘肃），经河北中医学院药学院张丹教                       出72个化合物，包括55个苯酞类化合物、13个有机酸类
        授鉴定为伞形科植物当归A. sinensis（Oliv.）Diels的干燥               化合物、4 个其他类化合物。混合对照品溶液的总离子
        根。Z-藁本内酯对照品（批号 MUST-18051010，纯度                     流图见图 1，当归化学成分的总离子流图见图 2，当归化
        99.55％）购自成都曼思特生物科技有限公司；正丁基苯                         学成分的鉴定结果及数据见表1。
        酞对照品（批号6066-49-5，纯度98％）、洋川芎内酯H对
                                                             ×10 8
        照品（批号94596-27-7，纯度98％）、洋川芎内酯I对照品                       2
                                                              1.8
        （批号94596-28-8，纯度98％）均购自上海源叶生物科技                       1.6
                                                              1.4
                                                             Counts  1.2 1
        有限公司；洋川芎内酯 A 对照品（批号 63038-10-6，纯度                     0.8
        98％）、欧当归内酯 A 对照品（批号 88182-33-6，纯度                     0.6
                                                              0.4
                                                              0.2
        98％）均购自成都普瑞法科技开发有限公司；甲酸、乙腈                             0
                                                                  2  4  6  8  10 12 14 16 18  20  22 24  26 28 30 32 34
        为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。                                                       t/min
        2 方法与结果                                                31：洋川芎内酯 I；33：洋川芎内酯 H；40：正丁基苯酞；56：洋川芎
                                                            内酯A；57：Z-藁本内酯；69：欧当归内酯A
        2.1 色谱条件
                                                                    图1 混合对照品溶液的总离子流图
            采用 ACQUITY UPLC BEH-C18 色谱柱（100 mm×
        2.1 mm，1.7 μm），以0.1％甲酸溶液（A）-乙腈（B）溶液为                 ×10 8
        流动相进行梯度洗脱（0～10 min，0％B→50％B；10～                       4.5 4
        16 min，50％B→60％B；16～20 min，60％B→85％B；20～              3.5 3
                                                             Counts  2.5
        22 min，85％B；22～25 min，85％B→95％B；25～26 min，             2
        95％B→100％B；26～36 min，100％B）；柱温为30 ℃；流                 1.5 1
                                                              0.5
        速为0.3 mL/min；进样量为2 μL。                                 0
                                                                  2  4  6  8  10 12  14  16  18 20  22 24 26  28  30 32 34
        2.2  质谱条件                                                                    t/min
            离子源为电喷雾离子源（ESI），采用正离子扫描模式，                               图2 当归化学成分的总离子流图


        ·580 ·  China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 5                                    中国药房    2022年第33卷第5期
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