Page 33 - 《中国药房》2022年5期

表2 各组HEK293细胞的相对荧光素酶活力测定结果 蛋白的表达水平显著升高（P＜0.05）。结果见图 2 和
（x±±s，n＝6） 表5。

组别 相对荧光素酶活力 组别 相对荧光素酶活力
FN 250 kDa
对照组 1.00±0.05 2.5 μmol/L G-Rb1组 4.88±0.78 b
TGF-β1组 5.16±0.71 a 5.0 μmol/L G-Rb1组 4.85±0.65 b
COL-Ⅰ 140 kDa
SIS3组 1.60±0.39 b 10 μmol/L G-Rb1组 4.23±0.40 b
1.0 μmol/L G-Rb1组 4.97±0.64 b 20 μmol/L G-Rb1组 3.42±0.68 b
E-cadherin 130 kDa
a：与对照组比较，P＜0.05；b：与TGF-β1组比较，P＜0.05
Smad3 55 kDa
表3 各组HK-2细胞的相对活力测定结果（x±±s，n＝6）
p-Smad3 52 kDa
组别 细胞相对活力，％ 组别 细胞相对活力，％
对照组 100.00±4.90 5.0 μmol/L G-Rb1组 94.49±1.83 α-SMA 42 kDa
TGF-β1组 92.23±3.83 a 10 μmol/L G-Rb1组 90.82±2.23
β-actin 43 kDa
1.0 μmol/L G-Rb1组 97.06±5.71 20 μmol/L G-Rb1组 92.69±4.03
A B C D E F
2.5 μmol/L G-Rb1组 95.12±4.62 30 μmol/L G-Rb1组 93.11±4.64
A：对照组；B：TGF-β 1 组；C：SIS3 组；D：10 μmol/L G-Rb1 组；
a：与对照组比较，P＜0.05
E：20 μmol/L G-Rb1组；F：30 μmol/L G-Rb1组
3.4 HK-2 细胞中α-SMA、COL-ⅠⅠ、FN mRNA 表达的 图 2 各组 HK-2 细胞中α-SMA、p-Smad3、Smad3、E-
测定结果 cadherin、COL-ⅠⅠ、FN蛋白表达的电泳图
与 对 照 组 比 较 ，TGF-β 1 组 HK-2 细 胞 中 α-SMA、
表 5 各 组 HK-2 细 胞 中 α-SMA、p-Smad3、Smad3、
COL-Ⅰ、FN mRNA 的相对表达量均显著升高（P＜
E-cadherin、COL-ⅠⅠ、FN 蛋白表达水平测定结
0.05）；与 TGF-β 1 组比较，SIS3 组、30 μmol/L G-Rb1 组
果（x±±s，n＝3）
HK-2细胞中α-SMA、COL-Ⅰ、FN mRNA的相对表达量，
α-SMA/ p-Smad3/ Smad3/ E-cadherin/ COL-Ⅰ/ FN/
20 μmol/L G-Rb1 组 HK-2 细胞中 COL-Ⅰ、FN mRNA 的 组别 β-actin β-actin β-actin β-actin β-actin β-actin
相 对 表 达 量 和 10 μ mol/L G-Rb1 组 HK-2 细 胞 中 FN 对照组 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00
a
a
a
a
a
mRNA 的相对表达量均显著降低（P＜0.05）。结果见 TGF-β1组 1.61±0.16 1.46±0.12 1.67±0.15 0.63±0.05 1.55±0.18 5.31±0.75 a
b
SIS3组 1.19±0.10 0.95±0.03 1.19±0.06 0.89±0.04 1.07±0.05 1.08±0.25 b
b
b
b
b
表4。
10 μmol/L G-Rb1组 1.42±0.15 1.25±0.09 1.44±0.25 0.75±0.06 1.34±0.12 4.17±0.54 b
b
b
表4 各组HK-2细胞中α-SMA、COL-ⅠⅠ、FN mRNA的 20 μmol/L G-Rb1组 1.27±0.15 1.06±0.04 1.19±0.11 0.82±0.05 1.11±0.11 2.41±0.19 b
b
b
b
b
b
b
b
b
b
b
相对表达量测定结果（x±±s，n＝3） 30 μmol/L G-Rb1组 1.08±0.14 0.96±0.05 1.15±0.06 0.90±0.02 1.07±0.12 1.89±0.32 b
组别 α-SMA COL-Ⅰ FN a：与对照组比较，P＜0.05；b：与TGF-β1组比较，P＜0.05
对照组 1.00±0.09 1.00±0.05 1.00±0.05 3.5.2 免疫荧光实验结果 与对照组比较，TGF-β 1组
TGF-β1组 1.66±0.23 a 1.57±0.04 a 3.36±0.25 a HK-2 细胞中α-SMA、FN 蛋白的荧光强度值均显著升高
SIS3组 1.18±0.24 b 1.27±0.04 b 2.17±0.05 b
10 μmol/L G-Rb1组 1.45±0.20 1.45±0.06 2.75±0.07 b （P＜0.05），E-cadherin蛋白的荧光强度值显著降低（P＜
20 μmol/L G-Rb1组 1.42±0.08 1.32±0.08 b 2.65±0.13 b 0.05）。与 TGF-β 1 组比较，SIS3 组和 10、20、30 μmol/L
30 μmol/L G-Rb1组 1.25±0.06 b 1.23±0.03 b 2.11±0.04 b
G-Rb1 组 HK-2 细胞中α-SMA、FN 蛋白的荧光强度值均
a：与对照组比较，P＜0.05 ；b：与TGF-β1组比较，P＜0.05
显著降低（P＜0.05），E-cadherin 蛋白的荧光强度值均显
3.5 HK-2细胞中α-SMA、E-cadherin、p-Smad3、Smad3、
著升高（P＜0.05）。结果见图 3（以 E-cadherin 蛋白的免
COL-ⅠⅠ、FN蛋白表达的测定结果
疫荧光图为例进行展示，其余图略）和表6。
3.5.1 Western blot实验结果 与对照组比较，TGF-β1组
表6 各组HK-2细胞中α-SMA、E-cadherin、FN蛋白的
HK-2细胞中α-SMA、p-Smad3、Smad3、COL-Ⅰ、FN蛋白
荧光强度值测定结果（x±±s，n＝3）
的表达水平均显著升高（P＜0.05），E-cadherin 蛋白的表
组别 α-SMA E-cadherin FN
达水平显著降低（P＜0.05）。与 TGF-β 1组比较，SIS3 组 对照组 2.35±0.10 16.83±1.55 2.01±0.14
和 20、30 μ mol/L G-Rb1 组 HK-2 细 胞 中 α-SMA、 TGF-β1组 7.31±0.33 a 5.49±0.45 a 10.34±0.61 a
p-Smad3、Smad3、COL-Ⅰ、FN蛋白的表达水平均显著降 SIS3组 3.89±0.48 b 13.27±0.72 b 5.34±0.96 b
10 μmol/L G-Rb1组 6.32±0.35 b 8.87±0.80 b 8.96±0.39 b
低（P＜0.05），E-cadherin 蛋白的表达水平均显著升高
20 μmol/L G-Rb1组 4.93±0.14 b 10.22±0.44 b 7.08±0.31 b
（P＜0.05）；10 μmol/L G-Rb1 组 HK-2 细胞中 p-Smad3、 30 μmol/L G-Rb1组 4.65±0.19 b 12.65±0.35 b 5.12±0.54 b
FN 蛋白的表达水平均显著降低（P＜0.05），E-cadherin a：与对照组比较，P＜0.05；b：与TGF-β1组比较，P＜0.05
中国药房 2022年第33卷第5期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 5 ·539 ·