Page 96 - 《中国药房》2022年4期
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transformation pathway.
        KEYWORDS     realgar；realgar nanoparticles；water-processed realgar；breast cancerstem cell；human breast cancer MCF-7 parent
        cell；invasion；metastasis

                            [1]
            2003 年，Al-hajj 等 从乳腺肿块中分离出少量抗原                  清、B27 添加剂、BCA 试剂盒均购自美国 Thermo Fisher
                    +
        表型为CD44 /CD24 的乳腺癌干细胞，首次证实乳腺癌                       Scientific 公司；人碱性成纤维细胞生长因子、人表皮生
                         －
        组织中也存在干细胞。随后的研究表明，乳腺癌干细胞                            长因子购自苏州近岸蛋白质科技股份有限公司；人工基
        具有对化疗、放疗及缺氧环境的抵抗性和高致瘤性、高                            底膜（matrigel）、脱脂奶粉均购自美国 BD 公司；青霉素
        侵袭转移性等特征，在乳腺癌的发生、发展、复发、转移                           和链霉素、结晶紫、吐温20（Tween 20）乳化剂、磷酸盐缓
        中发挥重要作用        [2－3] 。如何在乳腺癌的治疗中根除干细                冲液（phosphate buffer saline，PBS，pH7.4）、磷酸盐吐温
        胞，进而防止其复发和转移是学界目前亟待解决的科学                            缓冲液（phosphate buffer saline with Tween 20，PBST）、
        问题  [4－5] 。                                         十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶和浓缩胶
            雄黄，其主要成分为二硫化二砷。研究表明，雄黄                          缓冲液均购自北京索莱宝科技有限公司；异硫氰酸荧光
        在造血系统肿瘤特别是急性早幼粒细胞白血病中具有                             素（fluorescein isothiocyanate，FITC）标 记 的 人 抗 小 鼠
        巨大的治疗潜力        [6－7] 。笔者所在医院研制的复方黄黛片                CD44 单克隆抗体、藻红蛋白（phycoerythrin，PE）标记的
        （由青黛、雄黄、太子参及丹参组方而成）用于治疗急性                           人抗小鼠 CD24 单克隆抗体均购自 Biolegend（北京）生
        早幼粒细胞白血病的缓解率高、不良反应少且无骨髓抑                            物科技有限公司；兔源上皮钙黏着蛋白单克隆抗体、兔
        制性，在临床上应用广泛           [8－9] 。近年来，有研究发现，将            源波形蛋白单克隆抗体和兔源甘油醛-3-磷酸脱氢酶
        水飞雄黄纳米化（以下简称“纳米雄黄”）是提高雄黄溶                          （glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）多
        解度和生物利用度的有效途径，也是增强其对肺癌、肝癌、                          克隆抗体均购自美国Cell Signaling公司；聚偏氟乙烯膜
        乳腺癌等多种实体瘤细胞抑制活性的重要手段                       [10－11] 。  购自美国 Bio-Rad 公司；CCK-8 细胞增殖及细胞毒性检
        目前，纳米雄黄对白血病干细胞、肺癌干细胞的增殖抑                            测试剂盒、辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔免疫球蛋白
        制、诱导分化作用已有报道            [12－13] ，但其对乳腺癌干细胞          G 二抗及 ECL 化学发光底物试剂盒均购自合肥志宏生
        是否有抑制作用尚不清楚。因此，本研究在分析纳米雄                            物技术有限公司；其余试剂均为分析纯，水为纯净水。
        黄抑制人乳腺癌MCF-7亲本细胞的基础上，进一步探索                          1.3  细胞
        其对无血清培养乳腺癌干细胞增殖、悬浮球形成及分化                                人乳腺癌 MCF-7 亲本细胞株购自中国科学院细
                                        －
                                  +
        能力、迁移及侵袭能力、CD44 /CD24 细胞亚群比例、上                      胞库。
        皮间质转化通路相关蛋白表达等的影响，以探讨其可能                            2 方法
        的作用机制，为乳腺癌复发、转移及有效治疗提供新的                            2.1  纳米雄黄、水飞雄黄及其混悬液的制备
        理论与实验基础。                                                参考文献[10]，制备纳米雄黄和水飞雄黄，并按如下
        1 材料                                                方法制备混悬液：称取已灭菌的纳米雄黄和水飞雄黄
        1.1  主要仪器                                           5 mg 于离心管中，加入已灭菌的 PBS 5 mL，超声振荡
            本研究所用主要仪器包括：BNP-150CDF1型CO2细                    30 min使混匀，配制成质量浓度均为1 000 mg/L的混悬
        胞培养箱（苏州贝因医疗器械有限公司），IX73型倒置显                         液；取上述混悬液，用 PBS 分别稀释至不同质量浓度
        微镜（日本Olympus公司），Anthos 2010型全自动酶标仪                 （800、600、400、100、50、25、10 mg/L，以二硫化二砷计，
        （英国 Biochrom 公司），C6 型流式细胞仪（美国 BD 公                  下同） ，于4 ℃下保存，备用。
                                                                 [9]
        司），PAC300 型电泳仪（美国 Bio-Rad 公司），TS 2000A              2.2 细胞培养及观察
        型脱色摇床（海门市分析仪器厂），Amersham Imager 600                     MCF-7 亲本细胞血清培养：采用血清培养法，将
        型凝胶成像系统（美国General Electric公司），TGL-16M               MCF-7 亲本细胞按密度 1×10 mL 接种于含 10％胎牛
                                                                                     5
                                                                                         －1
        型高速台式冰冻离心机（湘潭湘仪仪器有限公司）等。                            血清、1％青链霉素的 RPMI 1640 培养基（以下简称
        1.2 主要药品与试剂                                        “SSM”）中，置于 37 ℃、5％CO2、100％相对湿度的细胞
            药用雄黄（批号140408，主要成分为二硫化二砷，约                      培养箱中培养（培养条件下同），使用倒置显微镜观察其
        200目，粒径小于76 µm，纯度98％，产自湖南常德）购自                      形态，每3天传代1次，取对数生长期的MCF-7亲本细胞
        长沙医药公司，经解放军联勤保障部队第 967 医院药剂                         用于后续实验。MCF-7亲本细胞无血清培养：采用无血
        科主任药师王晓波鉴定为真品；阿霉素对照品（批号                             清培养法，将上述对数生长期的MCF-7亲本细胞按密度
                                                                    －1
        2468183，纯度99％）购自西格玛奥德里奇（上海）贸易有                      5×10 mL 接种于含 20 ng/mL 人碱性成纤维细胞生长
                                                                4
        限公司；RPMI 1640培养基、DMEM-F12培养基、胎牛血                    因子、20 ng/mL 人表皮生长因子、2％B27、1％青链霉素

        ·474 ·  China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 4                                    中国药房    2022年第33卷第4期
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