Page 101 - 《中国药房》2022年4期

10 7.2 10 7.2 10 7.2 10 7.2 10 7.2
10 6 10 6 10 6 10 6 10 6
10 5 10 5 10 5 10 5 10 5
CD24-PE 10 4 3 CD24-PE 10 4 3 CD24-PE 10 4 3 CD24-PE 10 4 3 CD24-PE 10 4 3
10
10
10
10
10
10 2 10 2 10 2 10 2 10 2
10 1 10 1 10 1 10 1 10 1
10 1 10 10 3 10 10 10 6 10 7.2 10 1 10 10 3 10 10 10 6 10 7.2 10 1 10 10 3 10 10 10 6 10 7.2 10 1 10 10 3 10 10 10 6 10 7.2 10 1 10 10 3 10 10 10 6 10 7.2
5
2
4
5
4
2
5
4
2
5
4
2
5
4
2
CD44-FITC CD44-FITC CD44-FITC CD44-FITC CD44-FITC
A.空白对照组 B.水飞雄黄1 mg/L组 C.水飞雄黄2.5 mg/L组 D.水飞雄黄5 mg/L组 E.水飞雄黄10 mg/L组
10 7.2 10 7.2 10 7.2 10 7.2 10 7.2
10 6 10 6 10 6 10 6 10 6
10 5 10 5 10 5 10 5 10 5
CD24-PE 10 4 3 CD24-PE 10 4 3 CD24-PE 10 4 3 CD24-PE 10 4 3 CD24-PE 10 4 3
10
10
10
10
10
10 2 10 2 10 2 10 2 10 2
10 1 10 1 10 1 10 1 10 1
5
2
5
2
5
4
4
4
2
5
2
4
5
4
10 1 10 10 3 10 10 10 6 10 7.2 10 1 10 10 3 10 10 10 6 10 7.2 10 1 10 10 3 10 10 10 6 10 7.2 10 1 10 10 3 10 10 10 6 10 7.2 10 1 10 10 3 10 10 10 6 10 7.2
2
CD44-FITC CD44-FITC CD44-FITC CD44-FITC CD44-FITC
F.阿霉素1 mg/L组 G.纳米雄黄1 mg/L组 H.纳米雄黄2.5 mg/L组 I.纳米雄黄5 mg/L组 J.纳米雄黄10 mg/L组
图 7 各组乳腺癌干细胞CD44 /CD24 细胞亚群比例的流式图
－
+
+
表4 各组乳腺癌干细胞CD44 /CD24 细胞亚群比例比
－
上皮钙黏着蛋白 135 kDa
较（x±±s，n＝3，％％）
+
－
－
+
组别 CD44 /CD24 细胞亚群比例 组别 CD44 /CD24 细胞亚群比例 波形蛋白 51 kDa
空白对照组 96.57±1.81 阿霉素1 mg/L 73.37±2.27 a
水飞雄黄1 mg/L 94.23±2.33 a 纳米雄黄1 mg/L 90.27±2.74 ab
GAPDH 37 kDa
水飞雄黄2.5 mg/L 80.41±2.71 a 纳米雄黄2.5 mg/L 75.92±1.93 ab
水飞雄黄5 mg/L 72.47±2.35 a 纳米雄黄5 mg/L 62.73±1.59 ab 空白对照组 水 飞 雄 黄 纳 米 雄 黄 水 飞 雄 黄 纳 米 雄 黄
2.5 mg/L组 2.5 mg/L组 10 mg/L组 10 mg/L组
水飞雄黄10 mg/L 53.73±2.22 a 纳米雄黄10 mg/L 43.43±1.37 ab
图8 各组乳腺癌干细胞上皮间质转化通路相关蛋白表
a：与空白对照组比较，P＜0.01；b：与相同质量浓度的水飞雄黄组
达的电泳图
比较，P＜0.01
3.6 纳米雄黄对乳腺癌干细胞上皮间质转化通路相关 法成本相对较低，且可方便快捷地分离富集肿瘤干细胞
蛋白表达的影响 样细胞 。因此，本研究以人乳腺癌MCF-7亲本细胞为
[14]
与空白对照组比较，水飞雄黄、纳米雄黄各给药组 对象，采用无血清培养法培养出了乳腺癌干细胞并对其
乳腺癌干细胞中上皮钙黏着蛋白的表达水平均显著升 进行性质鉴定；并以水飞雄黄为参照，初步考察了纳米
高，波形蛋白的表达水平均显著降低（P＜0.01），且有随 雄黄对乳腺癌干细胞的抑制作用。在悬浮球培养期间，
着药物质量浓度增加而升高或降低的趋势；与相同质量 本研究对悬浮球细胞的自我更新能力进行了考察，发现
浓度的水飞雄黄比较，纳米雄黄下调波形蛋白表达及上 经SFM培养所得的悬浮球细胞，在SSM培养条件下，可
调上皮钙黏着蛋白表达的作用更强（P＜0.01）。结果见 呈单层贴壁生长；将此贴壁细胞重悬于SFM 中，细胞可
表5、图8。 继续呈悬浮球样增殖，说明干细胞悬浮球具有一定的自
+
－
表5 各组乳腺癌干细胞上皮间质转化通路相关蛋白表 我更新能力。CD44 /CD24 细胞亚群比例是公认的乳
[1]
达水平比较（x±±s，n＝3） 腺癌干细胞表面标志物 。前期预实验发现，第5代悬浮
－
球细胞CD44 /CD24 细胞亚群比例为（96.57±1.81）％，
+
组别 上皮钙黏着蛋白 波形蛋白
空白对照组 0.25±0.01 1.05±0.05 所以本研究采用第5代悬浮球细胞作为乳腺癌干细胞进
水飞雄黄2.5 mg/L组 0.49±0.03 a 0.79±0.04 a 行实验，这也在一定程度上证实了无血清培养法是高度
水飞雄黄10 mg/L组 0.82±0.05 a 0.54±0.02 a
纳米雄黄2.5 mg/L组 0.74±0.05 ab 0.66±0.04 ab 富集肿瘤干细胞的有效途径之一。
纳米雄黄10 mg/L组 1.21±0.07 ab 0.16±0.01 ab 近年来研究发现，与水飞雄黄比较，纳米雄黄对多
a：与空白对照组比较，P＜0.01；b：与相同质量浓度的水飞雄黄组 种类型肿瘤细胞的抑制作用更强、生物利用度更高，且
比较，P＜0.01 纳米雄黄能通过抑制细胞增殖、阻滞细胞周期、诱导凋
4 讨论 亡等途径对乳腺癌细胞发挥抑制作用，其还能通过抑制
目前，分离肿瘤干细胞较常用的方法有3种：流式与 基质金属蛋白酶 2、基质金属蛋白酶 9、上皮间质转化通
磁珠细胞分选法、侧群细胞分选法、无血清培养法。前 路相关蛋白的表达而表现出抗侵袭转移的潜力 [15－18] 。
两种方法对分选设备及细胞的要求较高，而无血清培养 本研究以水飞雄黄为参照，通过 CCK-8 实验、悬浮球形
中国药房 2022年第33卷第4期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 4 ·479 ·